为什么ELISA试剂盒回收DNA片段回收率低

发布网友发布时间：2022-05-27 12:15

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热心网友时间：2023-10-21 17:57

1.在做回收率试验时，应在标准液浓度的80%、100%、120%三个浓度作回收率。在做样品含量时，应尽可能接近标准液浓度，这样才可能避免标准曲线的线性不佳问题。用空白血浆做标准曲线，计算的回收率。
2.一般不去特意检测提取的得到的模板浓度，纯度要注意一下，紫外分光提取DNA后的电泳条带如果不是特别暗，PCR时如果总体系是25 l，DNA模板加0因为DNA聚合酶需要结合在双链区域，才能启动后续的脱氧核糖核苷酸的聚合作用。设计所需扩增基因的引物，才能扩增出你所需要的片段啊。
3.试剂问题、操作问题、样品问题。PCR后电泳检测的结果，此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率如果片段较大。
4.回收的胶块太大（>400 mg）：如果需要处理的胶块太大，应先将其切成小块，做两次回收或选用大量型回收试剂盒。
5.胶块未全部溶解：溶解凝胶时应置于55℃水浴，不断上下颠倒，确定胶块完全溶解后再进行下一步骤。
6.漂洗液中未加无水乙醇：第一次使用前应在漂洗液中加入无水乙醇。漂洗液每次用后应拧紧瓶盖，以免乙醇挥发，降低回收率。