293T细胞是怎么包装病毒的
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发布时间：2022-05-12 04:24
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时间：2023-09-27 20:13
第一天：
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天：
1.转染293FT细胞。
1. 500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2. 500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3. 5min后，将，溶液混合，室温静止30min
4. 从6孔板中吸出1ml培养基，然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物。
2. 6-10h后，移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以正常培养液DMED+
10%FBS（从此刻开始算时间）。
第三天：
3.转染24h后，荧光显微镜下观察，转染效率应达到70%以上
第四天：
4. 48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤， 同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4. 感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。
第五天：
5. 72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清，然后再次感染目的细胞。
6. 一般感染48h后，就能见到明显的荧光。
说句实话我是复制过来的，希望可以帮你。。。
