划痕实验原理及步骤
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发布时间：2022-05-12 01:10
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热心网友
时间：2023-11-01 01:17
细胞划痕是实验室分析细胞迁移能力的一种常用方法，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。划痕实验原理：在细胞培养皿或者微孔板中培养的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”，划痕边缘的细胞会向空白区域迁移，使“划痕”愈合。通过显微成像技术观察并计算空白区域面积的改变从而计算出不同处理条件下细胞的迁移效率。当然，也可以通过计算细胞覆盖板底的面积变化来计算迁移效率。
通常，划痕可以使用Tip 头手动制造，也可以使用一些商品化耗材如 culture Insert 来制造既定宽度的划痕，如果实验通量较高，也可以使用全自动微孔板细胞划痕仪（安捷伦BioTek AutoScratch 全自动划痕仪）来实现96孔板的划痕操作。
划痕实验步骤：
1、根据实验通量准备孔板，如果是手动观测记录划痕过程，需要在孔板底部预先划线，如果使用自动划痕器则不需要
2、接种细胞，根据细胞特点和所选择的微孔板孔径接种合适的细胞数量，接种过夜后细胞融合度达到100%，单层细胞
3、制造划痕，使用无菌Tip 头、牙签、商品化耗材，或者自动细胞划痕器在单层细胞上制造划痕，尽量确保样品组之间划痕宽度均一
4、细胞清洗，划痕完成后用PBS 洗去不贴壁细胞，更换培养基，细胞清洗可手动清洗也可以使用自动化洗板机，相比手动清洗，自动化洗板机可以更好的保护细胞，减少人为引入的变量
5、细胞培养、观察及数据分析
一般情况下，划痕实验可设计24小时实验，4-6小时观察拍摄一次图片，计算细胞迁移效率。
如果使用微孔板成像检测设备（BioTek Cytation 5 细胞成像多功能微孔板检测系统）进行观察和拍摄，步骤如下：
5-1、设置温度和气体浓度，提供细胞培养环境
5-2、将微孔板置于仪器内，设置24小时动力学检测，每4个小时拍摄一次，自动完成每个样本的多时间点拍摄
5-3、24小时实验完成，将微孔板取出，通过软件将每个样品的多个时间点的图像和数据一键导出
5-4、生成划痕动态视频，计算每个样本的细胞迁移效率。
使用微孔板成像检测设备，可避免24小时内将细胞在培养箱与显微镜之间反复转移，同时软件的自动识别和计算功能也节省了大量的人力分析时间，提供更客观、准确、真实的实验数据。
热心网友
时间：2023-11-01 01:17
一.准备：
所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）
二.流程：
1.先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在孔中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3.第二天用*头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，*头要垂直，不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。
