请问引物设计是用mRNA和其内部的CDS为模板都可以吗?
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发布时间:2022-05-10 09:52
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热心网友
时间:2023-11-04 21:29
mRNA和CDS的序列是一致的,只不过是RNA和DNA的U和T的区别。
PCR是合成DNA,当然是用CDS了。CDS是编码序列,染色体的DNA是体内转录后剪切才表达,构建质粒的DNA在体外细胞内培养剪切不了。
酶切位点的选择是根据构建质粒所用的载体上的酶切位点,和CDS上的酶切位点决定的。
原则是:1.选择载体上位置相差不少于6个碱基的两个酶切位点,
2.两种酶要有最适缓冲液,
3.两种酶不是同尾酶,即不能切相似的序列,
4.两种酶最好比较常用,这样价格不贵,容易买到,
5.最后也是非常重要的,要选择目的基因即CDS上没有的酶切位点,这个可以在Google搜索Web cutter 2.0这个网页,输入CDS序列,查看CDS上的酶切位点,选择可以使用的酶切位点。