FRET法如何标测蛋白质相互作用

发布网友发布时间：2022-05-10 12:43

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热心网友时间：2023-10-09 16:51

首先是FRET原理：满足下列条件后，一个发光基团（称donor即供体荧光）所发出的激发光能够激发和另一个发光基团（acceptor 即受体荧光）发生荧光（即供体将能量通过共振形式传递给受体，所以受体能发光）：1，供体的发射光谱和受体的激发光谱至少有30%的重叠，2，供体和受体荧光基团距离在10nm以内，3，供体和受体的偶极成特点角度。

如果激发供体荧光基团，却能检测到受体荧光基团也发出了荧光（注意：受体荧光基团并没被外源光激发，而是供体将能量传递到受体了），那么说明这两个荧光基团之间产生了FRET效应。

测蛋白相互作用：
如果两个蛋白质之间的物理距离小于10nm，通常就认为蛋白质间发生了相互作用。如果将供体和受体荧光分别连到两个蛋白上，如果能检测到两个荧光基团能发射FRET效应，说明两个蛋白很近，即发生了相互作用。

热心网友时间：2023-10-09 16:52

简单的说，发光基团的荧光被淬灭基团的荧光淬灭了，即发生了FRET现象。说明两个蛋白可以靠得足够近，默认这两个蛋白发生相互作用。

因此，用FRET显示蛋白相互作用是，要在需要检测的蛋白上连接可以发生FRET的荧光基团，再通过光谱分析检测。