测量蛋白质等电点的方法有哪些?谢谢
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发布时间：2022-05-10 16:31
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时间：2023-10-16 07:15
交错分配法。
对一种特定的蛋白质，在不同盐系统中，pH和其分配系数之间的关系应不同，而在等电点时，得到的均为不带电时分子的分配系数。
对不同的盐系统，其等电点时的分配系数应相等，两条pH和分配系数关系的曲线必交于一点，该点所对应的pH值即为该特定蛋白质的等电点。根据这一原则测定蛋白质等电点的方法，称为交错分配法。
特性
蛋白质在溶液中有两性电离现象。假设某一溶液中含有一种蛋白质。当pI=pH时该蛋白质极性基团解离的正负离子数相等，净电荷为0，此时的该溶液的是pH值是该蛋白质的pI值。某一蛋白质的pI大小是特定的，与该蛋白质结构有关，而与环境pH无关。
在某一pH溶液中当pH>pI时该蛋白质带负电荷，反之pH<pI时该蛋白质带正电荷，pH=pI时该蛋白质不带电荷。人体内pH=7.4；而体内大部分蛋白质的 pI<6； 所以人体内大部分蛋白质带负电荷。
以上内容参考：百度百科-蛋白质等电点
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时间：2023-10-16 07:15
等电点的计算：对于所有的R基团不解离的氨基酸而言（即解离只发生在α-羧基和α-氨基上），计算起来非常简单：PI＝（PK1’+PK2’）/2若是碰到R基团也解离的，氨基酸就有了多级解离，这个公式就不好用了，比如Lys、Glu、Cys等。aa Cys Asp Glu Lys His ArgPK’α-羧基 1.71 2.69 2.19 2.18 1.82 2.19PK’α-氨基 8.33 9.82 9.67 8.95 9.17 9.04PK’-R-基团 10.78（-SH） 3.86（β-COOH） 4.25（γ- COOH） 10.53（ε-NH2） 6（咪唑基） 12.48（胍基）在这种情况下可以按下面的步骤来计算：
<1> 由PK’值判断解离顺序，总是PK1’< PK2’< PK3’< …，即谁的PK’值小，谁就先解离。
<2> 按照解离顺序正确写出解离方程式：简式，注意解离基团的正确写法。<3> 找出呈电中性的物质，其左右PK’值的平均值就是氨基酸的等电点：PI＝（PK左’+PK右’）/2以Lys为例：在黑板上用简式演示
<3>等电点的测定：等电聚焦法：这是一种特殊的电泳，其载体上铺有连续的PH梯度的缓冲液，然后将氨基酸点样，只要该处的PH与氨基酸的PI不同，则氨基酸就会带电，PH值>PI时，aa带-电；PH值<PI时，aa带+电。通电后，氨基酸就会移动，直到某处的PH＝PI，氨基酸才呈电中性，不再移动，因此，可以测出PI。等电点沉淀所有的氨基酸均为两性物质，亦即它们至少含有一个酸性基（carboxyl）及一个碱性基（α-amino）。
这些可游离的团基在pH变化时，因释出或接受质子而可充当弱酸或弱碱，其离子化特性与其它物质一样遵守Henderson-Hasselbalch方程式：pH = pKa + log10 [未质子化的形式（碱）] / [已质子化的形式（酸）]即pH = pKa + log [A-] / [HA] 氨基酸可以三种形式存在，即正电荷（cation）、两性离子（zwitterion）或双极性离子（dipolar ion）及负电荷（anion）等三种，若在酸性溶液中带正电荷，则在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一pH值下其净电荷为0，且在电场中不移动时，称此pH值为它的pI值（等电点）。因为净电荷为零，净电斥力不存在的缘故，大部份蛋白质於等电点的pH值下，其溶解度最小。相反的，当溶液的pH值低於或高於pI，所有蛋白质分子所带净电荷必为同号，彼此之间有相斥力，不会凝结。所以，将pH调到等电点的大小，则大部份的蛋白质将会沉淀，这种现象可以应用於估算某蛋白质的等电点.
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时间：2023-10-16 07:15
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时间：2023-10-16 07:16
等电点的计算：对于所有的R基团不解离的氨基酸而言（即解离只发生在α-羧基和α-氨基上），计算起来非常简单：PI＝（PK1’+PK2’）/2若是碰到R基团也解离的，氨基酸就有了多级解离，这个公式就不好用了，比如Lys、Glu、Cys等。aa
Cys
Asp
Glu
Lys
His
ArgPK’α-羧基
1.71
2.69
2.19
2.18
1.82
2.19PK’α-氨基
8.33
9.82
9.67
8.95
9.17
9.04PK’-R-基团
10.78（-SH）
3.86（β-COOH）
4.25（γ-
COOH）
10.53（ε-NH2）
6（咪唑基）
12.48（胍基）在这种情况下可以按下面的步骤来计算：
<1>
由PK’值判断解离顺序，总是PK1’<
PK2’<
PK3’<
…，即谁的PK’值小，谁就先解离。
<2>
按照解离顺序正确写出解离方程式：简式，注意解离基团的正确写法。<3>
找出呈电中性的物质，其左右PK’值的平均值就是氨基酸的等电点：PI＝（PK左’+PK右’）/2以Lys为例：在黑板上用简式演示
<3>等电点的测定：等电聚焦法：这是一种特殊的电泳，其载体上铺有连续的PH梯度的缓冲液，然后将氨基酸点样，只要该处的PH与氨基酸的PI不同，则氨基酸就会带电，PH值>PI时，aa带-电；PH值<PI时，aa带+电。通电后，氨基酸就会移动，直到某处的PH＝PI，氨基酸才呈电中性，不再移动，因此，可以测出PI。等电点沉淀所有的氨基酸均为两性物质，亦即它们至少含有一个酸性基（carboxyl）及一个碱性基（α-amino）。
这些可游离的团基在pH变化时，因释出或接受质子而可充当弱酸或弱碱，其离子化特性与其它物质一样遵守Henderson-Hasselbalch方程式：pH
=
pKa
+
log10
[未质子化的形式（碱）]
/
[已质子化的形式（酸）]即pH
=
pKa
+
log
[A-]
/
[HA]
氨基酸可以三种形式存在，即正电荷（cation）、两性离子（zwitterion）或双极性离子（dipolar
ion）及负电荷（anion）等三种，若在酸性溶液中带正电荷，则在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一pH值下其净电荷为0，且在电场中不移动时，称此pH值为它的pI值（等电点）。因为净电荷为零，净电斥力不存在的缘故，大部份蛋白质於等电点的pH值下，其溶解度最小。相反的，当溶液的pH值低於或高於pI，所有蛋白质分子所带净电荷必为同号，彼此之间有相斥力，不会凝结。所以，将pH调到等电点的大小，则大部份的蛋白质将会沉淀，这种现象可以应用於估算某蛋白质的等电点.
