蛋白质等生物大分子的分离提取应选用哪种离子交换剂?为什么

发布网友发布时间：2022-05-10 16:31

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热心网友时间：2023-10-16 07:15

蛋白质是高相对分子质量化合物，它的体积比无机离子大得多。蛋白质是带有许多可解离基团的多价态的两性电解质，在不同ph下，可以带不同数目的正负电荷。蛋白质有四级结构，只有在温和条件下，才能维持高级结构，否则将遭到破坏而变性，因此，蛋白质百度id老山野狗转载请注明出处分离纯化剂除了需要一般离子交换剂的性质外，还需要：1.具有良好的亲水性，2.具备均匀的大网结构（以容纳大体积蛋白质），3.选择适当电荷密度的交换剂（以免引起蛋白质空间构象变化失活），4.粒度越小，分辨率越高，主要有粗，中粗，细，超细等不同规格，要求粒径均匀，7.一般有工业级，分析级，生物级，分子生物级等不同级别。
常见类目：1.多糖类，又分为纤维素骨架，交联葡聚糖，交联琼脂糖等
2.聚乙烯醇类，3.聚丙烯酸羟乙酯类，4.Mono系离子交换树脂
参考自《生物分离原理及技术》第二版，欧阳平凯著，版权所有：南京工业大学

热心网友时间：2023-10-16 07:15

常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等
离子交换色谱：蛋白质和氨基酸一样会两性解离，所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电，pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中，表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差异来实现分离的。
亲和色谱：生物大分子有一个特性，某些分子或基因对它们有特异性很强的吸附作用。如镍柱中Ni可以与His标签的蛋白结合，这种只针对一种或一类物质的吸附就是亲和色谱的原理。
电泳：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和*结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
疏水色谱：疏水色谱基于蛋白质表面的疏水区与介质疏水配体间的相互作用，在高浓度盐作用下，蛋白质的疏水区表面上有序排列的水分子通过盐离子的破坏被释放，裸露的疏水区与疏水配体相互作用而被吸附。疏水色谱就是利用样品中各组分在色谱填料上配基相互作用的差异，在洗脱时各组分移动速度不同而达到分离的目的。随着盐离子浓度的降低，疏水作用降低，蛋白质的水化层又形成，蛋白质被解吸附。