手把手教学——琼脂糖凝胶电泳的实验步骤及常见问题分析

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实验原理：琼脂糖凝胶电泳原理基于DNA分子在电场中的迁移特性。DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下，会向正极泳动。琼脂糖作为一种天然聚合物，能够形成具有刚性的滤孔，孔径大小由琼脂糖浓度决定，从而影响DNA分子的迁移速率。

实验步骤：首先，根据DNA片段大小选择适当浓度的琼脂糖，配制胶液，加入Gelred染料，倒入模具，等待凝固。在凝胶中，加入样品与含溴酚蓝的loading buffer混合均匀。将胶块放入电泳槽，确保孔位于负电极，注入运行缓冲液，加样至泳道。启动电泳，调整电压至4-5V/cm，DNA分子将从负极泳动至正极，电泳时间通常为30-60分钟。

常见问题分析：问题一，加样孔有荧光，可能原因包括提取DNA时蛋白质残留，或基因组DNA在普通琼脂糖电泳中无法迁移出孔。问题二，条带扭曲呈波浪状，可能因缓冲液配制不一致，电压过高，或快速加样导致条带未稳定。问题三，条带弥散，可能由于DNA降解，电泳缓冲液失效，或PCR过程出现非特异性扩增。

在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，应确保各步骤的精确性和一致性，遵循实验规范，仔细处理样品，以获得清晰、准确的电泳结果。