Trizol法提取RNA:从样本前处理到操作步骤

发布网友发布时间：1天前

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热心网友时间：2024-12-04 22:03

实验原理：Trizol法提取RNA以苯酚为主成分，裂解细胞，破坏蛋白质结构并使核酸物质解聚。同时，添加8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等抑制RNA酶，保持RNA活性。Trizol保存的样品可在-80℃下保存6个月。

样本处理方法：1. 清洗细胞，去除培养液。2. 每1×108-2×107细胞加入1ml Trizol，轻摇培养皿。3. 吹打细胞，转移裂解液至离心管，吹打至清亮。4. 静置5-10分钟，开始提取RNA。

操作步骤：1. 收集细胞至离心管，离心去上清，清洗两次。2. 每1×106-2×107细胞加入1ml Trizol，吹打至清亮。3. 静置后提取RNA。

样本前处理：1. 移至研钵，加入液氮研磨至粉末。2. 加适量Trizol，研磨均匀。3. 转移至离心管，吹打充分，离心5-10分钟。

提取过程：1. 加入1/5体积氯仿，混合。2. 离心15分钟。3. 取上清液。4. 加异丙醇沉淀RNA。5. 洗涤RNA。6. 室温干燥RNA。7. 加DPEC水溶解RNA。8. 保存并电泳检查。

注意事项：1. 防止RNA酶污染。2. 明确提取目标。3. 检查提取效果。