易基因|干货:m6A RNA甲基化MeRIP-seq测序分析实验全流程解析

发布网友发布时间：2024-10-20 08:44

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热心网友时间：2024-12-07 17:30

易基因｜干货：m6A RNA甲基化MeRIP-seq测序分析实验全流程解析

专注表观组学十余年，领跑多组学科研服务的易基因，带来甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-seq/m6A-seq)实验的全面解析。本次解析将从技术原理、建库测序流程、信息分析流程和研究套路等四个维度，详细介绍如何进行m6A RNA甲基化测序分析。

一、甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-seq/m6A-seq)测序技术原理

表观转录组研究中，m6A RNA甲基化修饰是重要现象之一。m6A主要发生在终止密码子和3’UTR附近，参与*mRNA的稳定性、二级结构、microRNA靶标识别以及基因表达*等。MeRIP-seq/m6A-seq技术通过特异识别m6A修饰的抗体，对细胞内具有m6A修饰的RN*段进行免疫共沉淀，然后高通量测序，结合生物信息学分析，可在全基因组范围内系统研究m6A修饰状况。

二、甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-seq/m6A-seq)实验流程

确保高质量数据产出，每一步操作都需严格把控。从样品处理到最终数据获得，包括Total RNA样品检测、文库构建、文库质检和上机测序等关键步骤。

三、甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-seq/m6A-seq)信息分析流程

原始下机数据需进行质控、数据比对、m6A修饰区域检测、差异m6A修饰区域鉴定、mRNA基因表达水平分析、lncRNA筛选鉴定及表达量计算、circRNA鉴定及表达量计算和差异表达基因鉴定等步骤。分析流程包括GO和KEGG富集分析，以了解差异m6A关联基因与差异表达基因之间的重叠关系。

四、总结：甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-seq/m6A-seq)研究思路

MeRIP-seq实验通过m6A特异性抗体富集和测序，用于深入研究RNA的腺苷甲基化修饰。易基因自主研发微量RNA甲基化检测技术，支持样本起始量低至10-20μg，最低仅需5μg总RNA。

五、研究项目案例

案例研究《Sevoflurane impairs m6A-mediated mRNA translation and leads to fine motor and cognitive deficits》，探讨全麻药物对婴幼儿精细运动能力损伤的机制，首次关注了m6A甲基化在七氟烷麻醉影响精细运动损伤中的作用和机制。