qPCR数据处理秘籍:干货满满,看完还想再来一篇!
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发布时间：2024-10-20 10:31
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时间：2024-11-15 14:52
相对定量法中最常见的方法是△△Ct法，它基于比较Ct值来估算不同样本中特定基因的相对表达量。然而，此方法在实际应用中存在局限性，主要原因是实验间可能存在样本量、操作误差和生物差异等因素的不一致性。因此，引入内参基因成为关键步骤，它能显著提高数据的准确性和可比性。
Ct值指的是荧光信号达到设定阈值时所需的循环次数。理论上，起始模板越多，Ct值越小。但在实际扩增过程中，由于扩增效率（e）并非100%，真实表达量的计算需要考虑e值。△△Ct法通过比较目标基因和内参基因的Ct值差异，以及目标基因和内参基因的相对表达量差异，来纠正实验间差异，从而获得准确的基因表达量。
药物测试实验案例表明，仅比较目的基因表达量就可能得出错误结论。通过引入内参基因，可以校正操作误差和样本间差异，确保实验结果的准确性和可靠性。具体操作包括：选择内参基因进行qPCR实验，计算目的基因与内参基因的模板比值，结合对照组的内参基因表达量，推算出实验组目的基因在正常情况下的理论表达量，最终得出药物处理对目的基因表达量的影响。
数据处理案例解析展示了完整的实验流程，包括样本选择、样本制备、qPCR实验设置和结果分析。通过GraphPad软件进行绘图分析，直观展示了药物处理前后目的基因表达量的变化情况，验证了△△Ct法在真实实验场景中的应用价值。
值得一提的是，翌圣生物的qPCR mix系列已广泛应用于顶级期刊的科研项目中，如Nature、Cell等，支持科研人员在基因表达分析中获得准确、可靠的结果。此外，内参基因的选择和扩增效率的控制对于△△Ct法的准确性至关重要，合理选择内参基因并确保其扩增效率接近100%或基本一致，是确保实验结果准确性的关键。
