发布网友 发布时间:2024-10-21 20:44
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热心网友 时间:2024-11-03 06:24
离心方法是分离生物大分子和亚细胞物质的常用技术,其原理基于不同物质在液体介质中的沉降速度或密度差异。
沉降速度法依赖于液体介质密度与样品中最小颗粒密度之间的差异。在高转速和短时间离心条件下,利用此法可将不同组分分离。沉降平衡法则要求液体介质密度大于样品中最小颗粒密度,通过较低转速和较长时间离心实现分离。
差速离心法通过分步骤离心,先用低速沉降大颗粒,再高速离心上清液中沉淀中等颗粒,最后进行超速离心分离小颗粒。此法操作简便,能迅速浓缩所需组分,但回收率和纯度之间存在矛盾。
速度区带离心法将样品置于连续密度梯度液体中,不同大小的颗粒在离心作用下形成连续的带状分布,适用于分离密度相同、大小不同的物质,如蛋白质组份。然而,对于密度不同、大小相似的物质,则不易分离。
蔗糖梯度是一种常用的介质,通过配制不同浓度的蔗糖溶液形成梯度,用于梯度离心。各组份根据其下沉速度不同,最终形成独立的带状分布。
沉降平衡离心法利用静力学原理,通过长时间离心,使不同密度的组份在液体梯度中达到平衡位置,形成狭窄的带状分布。此法适用于分离大小相似但密度不同的物质,如核酸。
氯化铯梯度常用于平衡离心,具有高分辨率,能区别密度相差0.05的组分。然而,离心时间长且成本较高。现在已有"Percoll"聚蔗糖溶液替代氯化铯梯度,形成梯度速度快,离心时间缩短至1-2小时,同时保持良好的分离效果。
总的来说,离心方法利用不同物质在液体介质中的沉降速度或密度差异,通过精心设计的离心条件,实现生物大分子和亚细胞物质的高效分离。不同离心方法各有特点和适用范围,科学家可根据具体需求选择合适的离心技术。
离心机是借离心力分离液相非均一体系的设备。根据物质的沉降系数、质量、密度等的不同,应用强大的离心力使物质分离、浓缩和提纯的方法称为离心。一般说,离心机转速在20 000r/min以上的称为超速离心。离心技术,特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段。