定量PCR定义

发布网友发布时间：2024-10-15 21:25

我来回答

共1个回答

热心网友时间：2024-10-15 22:06

定量PCR技术在广义上，根据其操作方式和结果分析，主要分为五类:

1. 外参法与终产物分析: 这种方法是样本和阳性参照分别在两个反应容器内进行，但缺乏对样本质量的直接控制，可能导致假阴或假阳结果，且定量不准确。

2. 内参法与终产物分析: 内参法是在一个容器中处理样本和参照，虽然能排除假阴，但同样面临定量不精确的问题。

3. 外标法与过程监测: 这种方法可以监测扩增效率，对阳性样本的定量较为准确，但无法完全排除假阴结果。

4. 内参法与过程监测: 由于样本与参照共用反应条件，可能导致起始模板浓度高的抑制低浓度的反应，因此内参法的定量也不完全精确。

5. 外标法、过程监测和内对照结合: 这是推荐的做法，既能精确测定阳性样本的起始模板量，又能排除假阴性，是目前较为理想的方法。

在狭义的定量PCR技术中，主要使用外标法（通过荧光探针确保特异性）并监测PCR过程（检测扩增效率）来实现对起始模板的精确定量。同时，内对照的存在可以有效避免假阴性（扩增效率为零）的结果。在标准未明确时，理想的PCR系统应具有很高的灵敏度，能检测到一个拷贝的病毒。理论上，只要有拷贝数，样本就被认为是阳性；而无任何拷贝数则被视为阴性。

扩展资料

定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。狭义概念的定量PCR技术（严格意义的定量PCR技术）是指用外标法（荧光杂交探针保证特异性）通过监测PCR过程（监测扩增效率）达到精确定量起始模板数的目的，同时以内对照有效排除假阴性结果（扩增效率为零）。