植物细胞净化测定

发布网友发布时间：2024-09-26 13:37

共1个回答

热心网友时间：2024-10-04 05:55

在研究植物细胞的过程中，确保原生质体的纯度至关重要。原生质体中可能混有多种杂质，如亚细胞碎片、维管束成分、未解离细胞、破碎的原生质体以及微生物，这些杂质会对其功能产生负面影响。因此，需要进行净化处理。

首先，通过使用40-100微米的滤网过滤原生质体混合液，以滤掉未消化的细胞团和导管等杂质，收集过滤后的滤液。

接下来，对收集的滤液进行离心，通常选择500转/分钟的转速离心15分钟，使得原生质体沉淀，而碎片等杂质留在上清液中。然后，小心翼翼地吸取上清液，重复此步骤三次，以进一步去除杂质。

最后，用培养基对离心后的原生质体进行清洗，确保其不含酶，然后调整到104-106个/ml的适当密度进行培养。

在培养原生质体之前，通常会检测其活性。常用的检测方法包括胞质环流观察、活性染料染色和荧光素双醋酸酯（FDA）染色。其中，FDA染色因其直观性和简便性而常被选用。FDA本身无荧光且不具极性，可以穿过原生质体膜。当它进入原生质体后，会被脂酶分解成荧光素，有活力的细胞会显示出绿色荧光，无活力的则无荧光。具体操作是取0.5ml洗涤过的原生质体悬浮液，加入0.01%的FDA溶液，静置5分钟后，使用荧光显微镜观察，激发光滤光片选择QB24，压制滤光片用JB8。绿色荧光表示活性，无荧光则代表无活性。在叶肉原生质体中，由于叶绿素的影响，有活力的会呈现黄绿色荧光，无活力的则会呈现红色荧光。

扩展资料

细胞是植物体结构和功能的基本单位。植物界的种类形形色色、千差万别，但就植物体的构造来说，除了低等的类型（病毒）以外，都是由细胞构成的。单细胞的低等植物，一个细胞就代表一个个体，一切生命活动，包括新陈代谢、生长、发育和繁殖，都由一个细胞来完成；复杂的高等植物，一个个体是由无数的细胞构成的，细胞之间有了机能上的分工和形态结构上的分化，它们相互依存、彼此协作，共同保证着整个有机体正常生活的进行。