发布网友 发布时间:2024-09-05 04:05
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热心网友 时间:2024-10-26 09:41
在免疫组化实验中,标本的选择至关重要,主要包括组织标本和细胞标本两大类。组织标本主要包括石蜡切片和冰冻切片,其中石蜡切片是最常用且基础的,它能较好地保存组织形态,便于连续切片和多种染色观察。此外,石蜡切片具有长期储存的特性,有利于后续的回顾性研究。尽管石蜡切片制作过程可能影响抗原暴露,但通过抗原修复技术,它仍是免疫组化中首选的标本制作方法。
抗体在免疫组化实验中扮演关键角色,常用的有单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体由单个B淋巴细胞通过细胞融合杂交瘤技术制备,具有高度特异性。多克隆抗体则是通过将纯化抗原免疫动物,从动物血清中获得的,包含多个B淋巴细胞克隆产生的抗体混合物,具有一定的特异性但不如单克隆抗体。
染色方法根据标记物的不同,有免疫荧光法、免疫酶标法和亲和组织化学法。亲和组织化学法以高亲合力为基础,具有更高的敏感性,特别适合在细胞或亚细胞水平定位微量抗原或抗体,其中生物素-抗生物素染色法是常用的手段。
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。