发布网友 发布时间:2024-09-05 11:22
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热心网友 时间:2024-10-23 16:06
细胞培养是一项细致且关键的实验过程,它包括多个步骤,下面将逐一介绍。
首先,准备工作是基础。这项工作繁重且不容忽视,涉及器皿的清洗、干燥与消毒,如培养皿、培养基和试剂的配制、分装及灭菌。无菌室或超净台的清洁与消毒同样重要,以及培养箱和其他仪器的检查与调试。这些步骤需要遵循相关文献指导,确保无菌操作,以保证实验的顺利进行。
取材环节,需在无菌条件下,从机体中选取合适的组织细胞。如果是原代培养,通常需要经过消化分散细胞和分离等步骤,然后将细胞接入培养器。对于细胞株的扩大培养,这个步骤则可以省略。不同类型的组织其培养难度各异,幼体组织和分化程度低的组织相对容易,而肿瘤组织因其特性可能更易培养。取材后需尽快处理,如果无法立即培养,可以暂时保存于4℃的培养液中。取材过程中,保持无菌至关重要,避免接触有害物质,必要时可使用抗菌素处理。
培养阶段,将细胞接入培养瓶或培养板,组织块可以直接接入,细胞则需计数后按要求量接入,并加入培养基。细胞需要在恒温恒湿的培养箱中生长,定期观察细胞生长状况、形态、污染情况和培养基的pH值。原代培养有潜伏期,细胞开始活跃*后,需进行传代培养,以维持细胞活力。
为了长期保存细胞,特别是不易获取的突变型细胞或细胞株,需要进行冻存。一般在液氮-196℃下进行,加入保护剂后,以适当的速度冷冻,最终保存。复苏时,采用快速融化的办法,从液氮中取出后立即放入37℃水中,然后进行培养。冻存和复苏过程中的细节,如保护剂的选择、细胞密度、冷却和融化速度等,都会影响细胞的存活和活性。
细胞培养细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来,所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。