SSCP详细内容

发布网友发布时间：2024-08-07 08:45

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热心网友时间：2024-08-18 02:48

单链DNA分子通常展现出复杂的三维折叠结构，这个结构主要由碱基配对等分子内相互作用力维持。任何碱基的变动都会对这种结构产生影响，导致构象变化。这种构象差异在单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中的排阻大小上有所体现，因此，通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术，能够精确地分离出构象不同的分子。这种方法被称为单链构象多态性（SSCP）分析。

在PCR-SSCP技术中，突变检测的简便性和灵敏性得到了提升。其基本步骤包括：首先，通过PCR扩增目标DNA；其次，对特定的PCR产物进行变性，然后迅速复性，使其形成具有空间结构的单链DNA；接着，将适量的单链DNA进行非变性凝胶电泳；最后，通过放射性自显影、银染或溴化乙锭进行结果分析。如果观察到单链DNA的迁移速度与正常对照有差异，那么可以推断其构象发生了变化，暗示DNA片段可能存在碱基突变。

尽管SSCP方法简便、快速且灵敏，无需特殊设备，适用于临床实验，但它也存在局限性。首先，它主要用于突变检测，想要确定突变的确切位置和类型，还需进一步进行测序。其次，电泳条件的控制非常重要。此外，由于SSCP依赖于点突变对单链DNA构象的影响进行分离，某些位置的点突变可能对构象影响不大，加上其他因素，可能导致某些突变无法在聚丙烯酰胺凝胶电泳中被准确检测到，从而造成漏检的风险。