发布网友 发布时间:2024-08-19 19:57
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热心网友 时间:2024-08-29 05:33
在生物学实验中,一项关键的实验内容是染色观察线粒体,以了解其形态和功能。以3号片为例,实验步骤包括使用小狗胰脏,经过Regaud氏液固定、石蜡切片和铁苏木素染色。染色后的线粒体呈现黑色,分布在细胞质核周围,高倍镜下可见其形态多样,如粒状、线状或短棒状,且轮廓清晰。
胰脏的分泌细胞形状特殊,呈锥形,细胞核大而圆,位于细胞中央。细胞的游离端可见到大而圆的黑色颗粒,这些是分泌颗粒。线粒体作为细胞内的主要能量供应中心,其结构和功能的研究是细胞生物学的核心课题。为了研究线粒体膜、呼吸链酶和线粒体DNA,提取线粒体的技术显得尤为重要。在代谢旺盛的细胞如心肌、肝、肾等器官中,线粒体的含量丰富,实验中会从这些组织中提取。对于样本较少的情况,如光镜或电镜观察,可以从组织培养细胞中获取线粒体。
实验目标是理解线粒体提取的基本原理和过程,通过显微镜观察线粒体的形态。基本原理是利用线粒体在低温等渗液中的稳定性,通过差速离心分离并染色。操作时,需注意维持恒定的温度和pH,避免细胞损伤,使用等渗缓冲液,控制匀浆次数,以及在短时间内完成分离以保持线粒体完整性。
线粒体是1850年发现的,1898年命名。线粒体由两层膜包被,外膜平滑,内膜向内折叠形成嵴,两层膜之间有腔,线粒体中央是基质。基质内含 有与三羧酸循环所需的全部酶类,内膜上具有呼吸链酶系及ATP酶复合体。线粒体能为细胞的生命活动提供场所,是细胞内氧化磷酸化和形成ATP的主要场所,有细胞"动力工厂" (power plant)之称。另外,线粒体有自身的DNA和遗传体系, 但线粒体基因组的基因数量有限,因此,线粒体只是一种半自主性的细胞器。