类器官crispr-cas9基因编辑及慢病毒转染实验方法

发布网友发布时间：2024-08-20 07:11

共1个回答

热心网友时间：2024-08-30 12:21

类器官研究的兴起推动了crispr-cas9基因编辑技术在实验中的广泛应用。这项技术通过crRNA、sgRNA和Cas9蛋白的协作，精准地对类器官进行基因敲除或敲减，以创建模拟体内环境的模型。有三种主要的基因编辑路线：All in one质粒转染、病毒转化和RNP复合物导入，其中病毒转化法因其 sgRNA和Cas9蛋白持续存在而表现出较高的编辑效率。

对于类器官的转染，特别是慢病毒转染，需要注意几个关键步骤：首先，为提高转染效率，通常需要从基质胶中解离类器官，并用培养基重新悬浮；其次，消化成单个细胞可以提高转染成功率；转染时间通常在12到36小时，可根据实验条件调整；筛选时，类器官无需消化，可在基质胶内进行，因为大部分药物能穿透胶体。转染步骤包括：消化细胞、添加含polybrene的培养基，4小时后稀释polybrene，培养12-36小时后收集和处理，接着在基质胶中铺板并固化，再进行药物筛选。每个步骤都旨在确保转染的准确性和类器官的活性。

总的来说，crispr-cas9技术和慢病毒转染为类器官研究提供了强大的工具，但操作过程中需细致谨慎。如需进一步了解，欢迎大家加入讨论群进行交流。

(注：以上信息仅供参考)