做实验 | 选对Western Blot内参抗体,实验成功一半!

发布网友发布时间：2024-09-09 15:30

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热心网友时间：2024-10-30 15:28

在Western Blot实验中，内参抗体作为标准参照物的重要性不言而喻。它们是衡量目的蛋白表达量的关键，通常选择表达稳定、不受外界因素影响的管家基因蛋白，例如β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等。选择内参的目的是为了校正可能存在的样本处理误差，通过比较目的蛋白与内参蛋白的相对含量，确保实验结果的准确性。

为什么要使用内参？Western Blot是蛋白表达研究的常用手段，但操作过程中的误差可能影响结果。通过内参，可以校正总蛋白浓度和上样过程中的偏差，确保定量分析的可靠性。选择内参时，要考虑样本的物种来源、目的蛋白的分子量以及表达部位。例如，哺乳动物细胞通常选择β-actin，植物样本则选plant actin，而核蛋白检测则需核内参如Lamin A或Histone H3。

内参的选择需遵循样本特性和目的蛋白特性，如β-actin在大多数细胞中表达丰富，但某些特殊情况下可能不适用。GAPDH和β-tubulin作为内参，它们在细胞中的表达相对稳定，但特定条件下可能有所变化。在使用内参时，还要注意不同组织和样本类型对内参选择的影响，避免使用不适合的内参导致误差。

总的来说，选择合适的内参抗体并确保其表达稳定，对于Western Blot实验的成功至关重要。同时，内参的使用和曝光控制也需谨慎，以保证结果的清晰和准确性。在实验过程中，内参的使用不仅要遵循科学原则，还要根据具体实验条件灵活调整，以确保最终的实验结果具有说服力。