pcr反应体系包含哪些成分?

发布网友发布时间：2024-09-07 01:41

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热心网友时间：2024-10-20 19:41

PCR反应体系包含以下五种成分：模板、引物、底物、DNA聚合酶、PCR缓冲液。

1、模板是待扩增的目的基因或特异片段，纯度较高，浓度不宜过高。常见来源包括基因组DNA、质粒DNA、RNA如总RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等。

2、引物为人工合成的一对寡核苷酸序列，分别与模板DNA互补结合。浓度一般为0.1~0.5umol/L，长度15~30bp，GC含量45%~55%，碱基随机分布，避免嘧啶或嘌呤堆积，两引物间无互补链存在，与非目的扩增区无同源性。

3、底物包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP，与Mg2+结合，影响PCR扩增效率。需注意dNTP粉保存，避免变性和降解。

4、DNA聚合酶来源多样，Taq酶扩增效率高但易错配，Pfu酶有纠错功能但效率较低。目前多使用热稳定性好的Taq酶。

5、PCR缓冲液成分复杂，主要包含缓冲体系、一价阳离子（钾离子或铵根离子）、二价阳离子（镁离子）、辅助成分（如DMSO、甘油等），用于保持酶活性和帮助DNA接触缠绕。