loading buffer成分及作用

发布网友发布时间：2024-09-07 05:01

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热心网友时间：2024-10-26 09:28

loading buffer，中文名上样缓冲液，是电泳实验中不可或缺的组成部分。它在6*缓冲液中的作用显著，通过两种指示剂——溴酚蓝和二甲苯氰FF，分别指示电泳进程。溴酚蓝在不同琼脂糖浓度下，对应不同大小的DNA片段（如1Kb、0.6Kb等），而二甲苯氰FF则对应于2Kb和1.6Kb的双链DNA。甘油则能提升样品密度，防止其漂浮，SDS则用于变性聚合酶并保证蛋白质电泳时均匀迁移，而细胞裂解液加热则停止酶促反应，保护蛋白质免受降解。

在琼脂糖凝胶中，溴酚蓝指示300 bp的DNA迁移，二甲苯氰FF则指示4 kbp DNA。蛋白loading buffer通常含有SDS、甘油、溴酚蓝和TRIS，其中SDS使蛋白质电荷特性一致，甘油保证样品沉降，而溴酚蓝则提供电泳过程的观察。此外，EDTA作为络合剂，能稳定溶液中的金属离子，防止其催化作用。在SDS的作用下，蛋白质结构改变，电泳迁移速率与分子量成正比，不再受电荷和形状影响。