终极攻略 | WB内参的选择

发布网友发布时间：2024-09-06 18:09

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热心网友时间：2024-10-20 11:27

内参，作为细胞内部的稳定参照蛋白，对于Western Blot实验至关重要。它帮助我们比较不同条件或组织中目的蛋白的表达水平，确保数据的准确性。然而，选择和使用内参蛋白需要策略和考量。

首先，内参的使用是为了校正样品上样量的误差，因为蛋白浓度测定方法各有局限，如UV法易受干扰，比色法受多种因素影响。在实验中，通过检测内参蛋白的恒定表达，可以抵消定量和上样步骤的不确定性，提高结果的可信度。

选择内参时，要考虑样本来源、目的蛋白分子量、表达部位和实验环境。例如，哺乳动物实验中，β-actin、Tubulin等是常见的胞浆内参，而PCNA和Histone H3适用于核蛋白。要避免使用组织特异性强烈的内参，如在肌肉组织中，α-肌动蛋白亚型可能更适合而非β-actin。

在实际操作中，有多种方法利用内参。一种是直接标记内参抗体，另一种是在显色目的蛋白后单独检测内参，或者在转膜后根据蛋白大小分离，分别检测。总之，明智选择和正确使用内参蛋白是确保Western Blot结果准确性和可靠性的关键步骤。