怎样解决RAW264.7转染效率低的问题 ?

发布网友发布时间：2022-05-09 22:09

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热心网友时间：2023-10-24 05:19

其实RAW264.7细胞转染效率低怎样提高转染效率一直是困扰实验者的一道难题，特别对于比较大的质粒DNA的转染更是困难；我们实验室用Zeta Life Advanced DNA RNA AD600075转染raw 264.7细胞整理了一套优化方案希望对大家转染raw 264.7细胞提高转染效率有一定的帮助。

下图是在6孔板转9000bp左右的pcDNA3.1-GFP到RAW264.7细胞的荧光和细胞明场图片。

提高转染raw 264.7细胞条件如下

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。

2、复合物制备：将质粒DNA与Zeta Life Advanced DNA RNA AD600075转染试剂按照1:1（11ug:11ul）关系直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板，并轻轻混匀，放入培养箱中继续培养（不建议把复合物加入到无血清的培养基里面，我后期会进一步摸索此条件）。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、注意事项：

1细胞培养基：Zeta Life胎牛血清z7181-500，Gibco DMEM;

2本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如：lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等；