凋亡细胞凋亡的分子生物学检测方法
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发布时间：2024-10-08 17:30
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时间：2024-11-15 21:45
细胞凋亡是一个复杂的分子过程，它涉及染色体DNA的逐步断裂。首先，DNA在核酸水解酶的作用下分解为大片段，大约30%的DNA在Ca²⁺和Mg²⁺的协同下，由核酸内切酶在核小体间随机切割，形成180至200bp的核小体DNA聚合体。DNA链的断裂或单链缺口会引发一系列反应，其中包括脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用。TdT将荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素衍生物连接到DNA的3'末端，这就是所谓的脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)。正常或增殖中的细胞由于极少DNA断裂，因此不易被染色，而凋亡细胞则能被有效标记。
TUNEL或缺口翻译法结合了分子生物学和形态学，能对单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色，精确反映细胞凋亡的生物化学和形态特征。这种方法可以应用于各种样本，如石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养细胞和组织分离细胞，具有极高的灵敏度，能检测到极少量的凋亡细胞。相比之下，传统的组织化学和生物化学测定法的灵敏度较低。因此，TUNEL方法在细胞凋亡研究中得到了广泛应用。
扩展资料
凋亡，本意为大量减少，生物学上用作表示细胞衰老死亡。
