发布网友 发布时间:2024-10-08 13:24
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热心网友 时间:2024-10-25 19:49
在分子生物学实验中,选择一款高效的转染试剂是成功的关键。我亲身试用过的其中一款卓越之作就是Lipo3000,它的使用手册独特而实用。接下来,让我们一起详细解读这本仅有两张纸的小手册,以帮助那些对它感到困惑的朋友们。
包装与存储
Lipo3000的包装小巧精致,每个细节都体现着专业。务必将其存放在4℃冰箱中,切勿随意放置,以免影响试剂的活性,切记,这并非一时疏忽的借口。
前置准备
在开始转染之前,你需要准备的材料包括:你的质粒、无菌EP管,以及不可或缺的Opti-MEM培养基。Opti-MEM的特性和纯净度对于转染效果至关重要。
推荐转染方案
建议在细胞融合率达到70-90%时进行转染,这样能确保最佳的效率。对于转染试剂的用量,推荐直接使用5微升,既经济又精准。
siRNA转染小贴士
令人惊喜的是,对于siRNA的转染,Lipo3000并不需要额外的P3000,这简化了操作步骤,节省了时间。
操作流程详解
转染过程的核心步骤可以总结为:首先,将125微升的Opti-MEM与5微升的Lipo3000混合,形成转染复合物。接着,为DNA准备一个步骤,将125微升的Opti-MEM加入1-2.5微克的DNA,再加入2-5微升的P3000(是DNA量的两倍),确保DNA与转染剂充分结合。
为了获得最佳实验结果,Lipo3000推荐在6孔板上进行转染实验,这样可以保证充足的样本量和实验的可重复性。遵循这些指导,你将能轻松驾驭Lipo3000,提升转染成功率。