如何分析质粒dna电泳图?
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发布时间:2024-10-08 17:02
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时间:2024-12-04 01:32
质粒跑胶电泳图分析步骤如下:
首先,明确电泳图的左图为未酶切的环状质粒,右图为酶切过后的线性化质粒。
质粒正常状态为环状双链DNA,以超螺旋形式存在。超螺旋的质粒电泳条带类似弯月形,弯月开口向上。红色箭头指向的明亮条带即为超螺旋质粒的条带。
若质粒非环状DNA,变线性化,电泳速度减慢,条带形态更为规整。蓝色箭头所指即为线性化质粒条带。
质粒酶切后,理论上所有质粒均线性化,仅应出现一条整齐的线性化条带。如仍有超螺旋条带,表明酶切存在瑕疵。
电泳图中,某些线性化条带上方可见若隐若现的条带,为有缺口(nicked)质粒的条带。绿色箭头标注该现象。
样品品质影响断裂或缺口质粒的数量。断裂的/缺口的质粒较多时,线性化和nicked条带将更为明亮。反之,样品品质优秀,主要条带应为超螺旋质粒。
总结,电泳图中,最明亮的条带预示着主要为环状超螺旋质粒,表明样品品质良好。