RACE PCR验证基因特异性引物的对照
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发布时间：2024-10-11 17:55
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时间：2024-10-21 20:52
在进行RACE PCR验证基因特异性引物时，阴性对照是一个关键步骤。首先，仅使用一个特定的引物GSP进行实验，理想的预期结果是不应观察到任何条带。如果检测到产物，应检查循环参数或重新设计引物，以确保其特异性。
为了验证目的基因的表达，阳性对照非常重要。当你使用两个GSP（确保它们能产生重叠区域），结合接头连接的cDNA进行实验，理论上应能看到两个引物间重叠片段的出现。若无此片段，可能需要重新合成cDNA，或者尝试不同组织或细胞来源的样品。
在准备过程中，要特别注意的是，避免使用DEPC处理过的水。完成mRNA的纯化后，通过琼脂糖凝胶电泳对样品质量进行评估。对于哺乳动物的mRNA，其大小范围通常在0.5到12kb之间，可以看到4.5kb和1.9kb的rRNA条带。相比之下，非哺乳动物的mRNA通常会稍小一些，但具体大小会根据物种和实验条件而异。
扩展资料
RACE(rapid-amplificationofcDNAends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。
