细胞感染慢病毒48h后,细胞加嘌呤霉素48h后几乎没死细胞,但

将所需浓度的嘌呤霉素加入培养基，为筛选做好准备；高效筛选：在pac基因转染48小时后，将细胞转移至含有2微克/毫升终浓度的嘌呤霉素培养基；在传代时，循序渐进地提升浓度，逐步筛选出稳定的转导细胞；推荐从2到10微克/毫升的梯度进行；在筛选过程中，务必注意嘌呤霉素对实验的干扰，避免使用细胞进行实验。...

筛选稳定细胞系的方法主要有两种：一是质粒转染后通过单克隆筛选，这种方法虽然基础但效率相对较低；二是通过慢病毒感染，这是更为便捷和高效的选择，已成为主流技术。慢病毒能够感染各类细胞，并在细胞内稳定整合和长期表达，因此常用于制备特异性强的稳定细胞株，便于后续的实验如Co-IP或Pull-Down，以及...

慢病毒感染方法相比质粒转染更便捷高效，成为当前主流筛选稳定细胞系的方法。慢病毒可以感染所有种类的细胞，且感染后可整合至细胞基因组，实现长期稳定的表达，从而用于制备稳定表达或沉默特定基因的单克隆细胞株。

病毒感染目标细胞时，要考虑细胞生长状态和最佳的感染复数（MOI），并可能使用聚凝胺增强感染效率。最后，通过加压筛选，根据携带的筛选抗生素如嘌呤霉素，进行稳定细胞株的选择和培养。整个过程需要精细操作和不断优化，确保每一步的成功，以获得高效且纯度高的慢病毒，用于后续的细胞研究或治疗应用。

嘌呤霉素2-3天.脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%.病毒转染：先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞.包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间.包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量.转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株....

细胞培养过程中，从96孔到6孔，我们逐步观察基因敲除的效果，直至找到最理想的状态。对于lenti CRISPR V2慢病毒或嘌呤霉素筛选方法，它们提供了更为温和且高效的敲除手段，让实验更加便捷和可控。总的来说，sgRNA的设计和应用是一个系统且精细的过程，每一步都关系到基因编辑的成功与否。从引物设计到阳性...

一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天....

一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天....

一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天....

一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株.另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株.脂质体转染：在转染24小时后,消化细胞并计数.将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆.待细胞贴壁后,加入抗生素筛选.筛选时间和浓度视细胞而定.一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天....