稳转建系药筛细节盘点,你不清楚的细节都在这～

发布网友发布时间：2024-10-02 10:42

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热心网友时间：2024-11-30 19:13

稳转建系中的药筛细节对于确保实验结果至关重要。药筛通常包含两种方式：流式分选与抗性药物筛选。抗生素是进行药筛时常见的工具。以下是一些关键的药筛细节与注意事项。

首先，了解常用的药筛抗生素种类，包括嘌呤霉素、新霉素/G418、杀稻瘟菌素、潮霉素B与博来霉素。每种抗生素的使用方法与保存条件都不同。嘌呤霉素、新霉素与杀稻瘟菌素需用0.22um滤器过滤除菌，而潮霉素B与博来霉素的溶液无须过滤。所有抗生素都应避光保存，并分装成小份以避免反复冻融。

建立杀死曲线是筛选抗生素工作浓度的关键步骤。曲线通过确定抗生素杀死未转染细胞的最低有效浓度，进而指导后续实验。例如，以嘌呤霉素为例，需准备24孔板，铺板目的细胞，并在第二天达到适当的细胞汇合度后，加入不同浓度的嘌呤霉素，同时设置对照组。观察48小时内的细胞死亡率，选取能杀死90%细胞的最低浓度作为工作浓度。

进行稳转株筛选时，通常在细胞转染携带抗性基因的质粒或病毒48-72小时后进行。将细胞培养至60%-70%的汇合度，加入工作浓度的抗生素，同时设置空白对照组。筛选至少48小时后，将含有抗生素的培养基替换为新鲜完全培养基。实验组存活的细胞被认为为阳性细胞。

对筛选出的阳性细胞进行继续筛选与扩增，维持浓度为工作浓度的一半或根据空白细胞生长速度及细胞状态调整。这个过程将帮助确保稳转株的稳定性和纯度。最终，通过细胞保种与复检，即可得到混合克隆稳转株。

以上是药筛过程中的一些关键细节与步骤。汉恒生物提供包括抗生素、抗性基因*载体在内的多种服务，可为稳转建系提供一站式支持。如有任何问题，欢迎随时咨询。您可访问汉恒生物官网了解更多信息：hanbio.net/。