反转录PCR合成cDNA引物的选择

最后，最特异的引物选择是使用目标RNA的互补序列寡核苷酸。通过这种方法，PCR反应通常由与mRNA 3'端最近的引物启动第一条链的合成。这种引物仅产生所需的cDNA，从而实现更特异的PCR扩增，减少非目标产物的生成。

1． 随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此引物合成的cDNA中96%来源于rRNA。2． Oli...

RT-PCR就是将RNA先反转录为cDNA，在将转录得到的cDNA作为模板进行PCR反应扩增目标片段。用于反转录的引物根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异引物的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA三种都可。随机引物：适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA的转录反应...

在进行RT-PCR合成cDNA的过程中，引物的选择至关重要。首先，对于难以完全拷贝的特定mRNA，可以使用随机六聚体引物。这种非特异性引物让体系中的所有RNA分子都参与cDNA的第一链合成，PCR扩增过程中会赋予所需的特异性。然而，值得注意的是，通常采用随机六聚体合成的cDNA中，约有96%来自rRNA。相比之下，O...

引物是热稳定DNA聚合酶的结合位点，能够使子链合成时按照5’—〉3’的方向进行，不设置引物根本就没办法进行互补链的合成，因此尽管只有一条链也应该设置引物。一条模版合成了互补链后，在加热解链后，模板链和互补链均可再做下一次PCR合成的模版，按照指数增长方式快速的合成多个DNA。

显然是选random primer更好，其实说明书是有写的啦，原因是RT-PCR逆转录是要得到一个所有的RNA的cDNA库，然后再P出你要的“几个基因”，所以不是每个基因的mRNA都是有polyA的，很多都是没有的，microRNA，piRNA，很多都没有哦，所以如果你用oligo dT引物，就自然会miss掉很多（确实是很多）的RNA，...

2、看来你是新手，我的建议是在pubmed上查文献，肯定有人用过，关键词是ACE2、real-time pcr或quantitative pcr，当然还有Rat。3、最后再回到ncbi的genebank，用你得到的引物去检索，核对下序列是否完全正确。有时老外的资料也是有错的 相对定量PCR。引物设计有一定要求，片段长度已经说了，同时要做一个...

用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT 及基 因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞 mRNA，三种 都可。 RT-PCR 的关键步骤在是 RNA 的反转录，要求 RNA 模版为完整的且不 含 DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞 病毒反转录...

如果是要表达该基因的话把CDS区扩增出来就可以了 想扩增全场的话只能引物设计在前后端了 不过后面是Poly T， 所以估计反转录的时候得加一个adapter 这样才能扩增完整的出来 还是比较麻烦的 而且全长的话太长了 要用高保真的酶 很容易出现错配和突变 ...

两步法的话，第一步就不用基因特异引物，直接用oligo dt引物（或者oligo dt+随机引物），反转录得到的整套cDNA模板，也就包括了目的基因模板。第二步，再用Primer5.0设计特异引物扩增就行了。