sh-sy5y细胞怎么养?
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发布时间:2024-10-02 03:25
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时间:2024-12-09 15:59
SH-SY5Y细胞的培育技巧和注意事项
SH-SY5Y细胞是神经母细胞瘤的亚系,应用于脑科学研究中。在培育过程中,您可能会遇到细胞皱缩、聚团、脱落等问题,本文将为您解答这些问题。
SH-SY5Y细胞的常见问题与解决方案
运输过程中,细胞可能因震荡和温度变化而出现皱缩、聚团或脱落现象。正确的处理方法是,细胞在常温下运输后,放入培养箱静置2-4小时,若4小时后细胞仍未展开,可以静置过夜,但需留适量培养基于瓶中,拧松瓶盖。
若收货时细胞聚团,静置培养箱2-4小时后,进行传代,并使用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3分钟。
若细胞脱落,静置培养箱后,通过离心收集漂浮细胞,使用胰酶消化后重新铺板。
贴壁细胞的常规消化方法是将脱落细胞与常规消化后的细胞混合均匀后铺板。
SH-SY5Y细胞生长缓慢,需要注意以下几点:
是否使用DMEM/F12培养基?使用MEM/F12或DMEM/F12均能培养细胞,但形态略有差异。优质胎牛血清能显著改善生长状态。
培养基变黄?因细胞成簇生长,饱和密度大,培养基迅速变黄。需及时换液。
生长异常缓慢?当一周内无法传代,可将细胞消化后接种至小容器,增加密度,促进生长。平时传代时注意接种密度。
传代注意事项?不建议连续消化细胞,避免状态变差。消化时间通常为1-3分钟,若细胞解离太快,可用PBS稀释胰酶。吹打细胞时动作要轻,减少物理刺激。
SH-SY5Y细胞培养时,贴壁细胞呈上皮样,有短触角,倾向于成簇生长,悬浮细胞在生长过程中存在,是正常现象。若悬浮细胞过多,收集离心后,使用新鲜培养基重悬接种。
当细胞成团严重时,采取以下方法处理:
低密度接种,使用0.125%的胰蛋白酶消化5分钟,按1:6比例传代,使用新培养器皿,并延长换液频率至3天一次,防止脱落。
使用多聚赖氨酸包被的培养器皿,加快贴壁速度,降低成团几率。
更换新配制的培养基,并加大血清比例至不超过20%。
减少接种时的培养基量,加快贴壁速度,等待约8-12小时后,再补充培养基。
预防成团的关键在于维持良好的生长环境,定期调整接种密度和培养条件,避免细胞密度过高。遵循上述指南,您将能更有效地培育SH-SY5Y细胞。