常见的缓冲液种类有哪些?

发布网友发布时间：2024-10-02 13:01

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热心网友时间：2024-10-03 22:28

实验室中常见的缓冲液种类繁多，适用于不同实验需求，如质粒提取、核酸电泳、蛋白电泳、上样缓冲液、分子杂交、蛋白清洗与转膜、细胞培养、微生物培养等。以下对常用缓冲液种类进行详细介绍：

一、质粒提取过程中的 Solution I、II、III：分别用于螯合二价金属离子、溶解细胞并释放DNA、沉淀蛋白及中和反应。

二、核酸电泳缓冲液：TBE、TAE与MOPS，其中TBE适用于小分子DN*段电泳分析，TAE适用于大分子DN*段及酶促实验，MOPS则适用于更多RNA电泳分析。

三、蛋白电泳缓冲液：Tris-甘氨酸电泳缓冲液适用于Tris-甘氨酸凝胶系统，Bis-Tris凝胶系统可选择MES或MOPS缓冲液，Tris-tricine凝胶系统则使用Tricine缓冲液。变性缓冲液需加入SDS中和电荷，而非变性缓冲液用于研究蛋白空间结构和等电点。

四、上样缓冲液：DNA电泳、RNA电泳与SDS-PAGE电泳的Loading Buffer各有不同配方，用于实验中样品的上样。

五、分子杂交溶液：Denhardt's溶液用于膜杂交，SSC溶液、DNA变性缓冲液用于核酸杂交过程中的变性和清洗。

六、蛋白分析过程中，转膜液、TBST缓冲液用于WB、IF、IHC实验的封闭液、一抗或二抗配制及洗涤，WB封闭液减少非特异性抗体结合。

七、细胞培养常用平衡盐溶液，如PBS用于胚胎、组织、细胞的漂洗、冻存和培养，HBSS除了PBS的用途外，还可以用于细胞培养试剂配制、细胞计数稀释，EBSS缓冲能力最强，适合CO2环境中的细胞短期维持。

八、微生物培养常用溶液包括LB培养基、Ampicillin筛选抗性菌、IPTG用于蓝白斑筛选、X-Gal作为β-半乳糖苷酶显色底物，常用于β-半乳糖苷酶原位染色检测及蓝白斑筛选。

九、缓冲液选择：缓冲溶液通常由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成，pH值稳定，适用于各类实验。选择缓冲液需根据实验要求的pH范围来定。缓冲液中弱酸的pKa值是选择缓冲溶液的关键依据。

缓冲液配制过程中常见的问题包括pH值不准确、pKa值选择不当等。正确配制缓冲液对于实验结果至关重要。

本文总结了实验室常见缓冲液的配制方法，旨在帮助实验人员节约时间，避免查阅资料的繁琐过程。对于MCE所有产品，仅用于科学研究或药证申报，不提供任何个人用途的产品和服务。