超级干货:常用溶液、缓冲液、培养基配制 | MCE
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发布时间：2024-10-02 13:01
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时间：2024-10-03 22:28
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实验室中使用的溶液种类繁多，配制方法也各异，让人眼花缭乱。今天，小 M 为大家整理了近三十种常用溶液、缓冲液、培养基的配制方法，覆盖了分子生物学、蛋白分析、细胞培养、微生物培养等多个领域。
一、质粒提取之 Solution I、II、III：抽提质粒 DNA 常用碱裂解法，Solution I 用于抑制 DNase 活性，Solution II 用于溶解细胞释放 DNA，Solution III 用于沉淀蛋白及中和反应。
二、核酸电泳之 TBE、TAE 和 MOPS 缓冲液：TBE、TAE 和 MOPS 是实验室中常见的缓冲液，其缓冲能力与应用场景有所不同。TAE 缓冲能力弱于 TBE，且 TBE 跑胶分辨率高于 TAE。TBE 常用于小分子 DNA 片段电泳分析，TAE 适用于大分子 DNA 片段电泳分析及后续酶促实验，MOPS 则适用于更多 RNA 电泳分析。
三、蛋白电泳缓冲液：蛋白电泳缓冲液种类繁多，需根据凝胶体系选择。Tris-甘氨酸体系选择 Tris-甘氨酸电泳缓冲液，Bis-Tris 体系选择 MES 或 MOPS 缓冲液，Tris-tricine 体系选择 Tricine 缓冲液。蛋白电泳缓冲液分为变性与非变性缓冲液，变性缓冲液用于研究分子量大小，非变性缓冲液用于研究蛋白空间结构、等电点等。
四、上样缓冲液：上样缓冲液是各类实验不可或缺的，根据实验类型选择不同的 Buffer，如 DNA 电泳、RNA 电泳和 SDS-PAGE 上样缓冲液。
五、分子杂交常用溶液：分子杂交包含核酸杂交和蛋白杂交，实验中常用溶液包括 Denhardt's 溶液、SSC 溶液、DNA 变性缓冲液等。
六、蛋白清洗、转膜常用溶液：蛋白分析过程中，转膜液、清洗液等溶液不可或缺。WB 转膜液用于将印迹从凝胶转印至膜上，TBST 缓冲液可用于 WB、IF、IHC 等实验中封闭液、一抗或二抗配制以及抗体孵育后的洗涤，WB 封闭液可用于减少非特异性抗体结合。
七、细胞培养常用平衡盐溶液：平衡盐溶液是细胞培养过程中的常见溶液。PBS 主要用于胚胎、组织、细胞的漂洗、冻存和培养，HBSS 可用于细胞培养试剂的配制、细胞计数的稀释，EBSS 缓冲能力最强，专为 CO2 环境中的细胞短期维持而设计。
八、微生物培养常用溶液：LB 培养基是微生物培养中最常见的培养基，Ampicillin 可用于筛选抗性菌，IPTG 用于蓝白斑筛选，X-Gal 作为 β-半乳糖苷酶的显色底物，常用于 β-半乳糖苷酶原位染色检测及蓝白斑筛选。
九、缓冲液的进阶知识点：缓冲溶液通常由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成，其 pH 值在一定范围内可保持稳定，不因稀释或加入少量酸碱而发生 pH 的改变，可广泛应用于各类实验中。缓冲溶液的选择需根据实验所需维持的 pH 范围来选择合适的缓冲液。缓冲液中弱酸的 pKa 等于或接近于实验所要求的 pH 值，是选择缓冲溶液的主要依据。
9.1 缓冲液配制的常见问题：在缓冲液配制过程中，容易出现以下几个常见问题，希望帮助大家避免出错。
本期小 M 为大家总结了实验室常见缓冲液的配制方法，为大家节约在实验中反复查资料的时间，快来收藏文章吧！
MES：广泛应用于植物培养基、试剂溶液和生理实验中调节 pH 值。
Tris：三(羟甲基)氨基甲烷，一种低毒性的生物惰性氨基醇。
Bis-Tris：适用于血红蛋白分离。
HEPES：通常添加在细胞培养基中维持细胞稳态。
MOPS：常作电泳缓冲液组分。
Tricine：作为缓冲剂广泛应用于蛋白质电泳、核酸分析和免疫学等方面，可以帮助调节 pH 值并稳定化学反应。
EDTA：一种金属螯合剂，可减少金属离子催化的蛋白质氧化损伤，并维持蛋白质纯化过程中的还原环境，常用作蛋白质的纯化和储存。
ADA：是一种生物缓冲液。
PIPES：是 PIPES 缓冲液的重要组成部分。
BES：是一种标准生化缓冲液。
Boric acid：是一种防腐剂，用于配制生物缓冲液。
Glycine：一种氨基酸，用于配制生物缓冲液。
Tryptone：胰蛋白酶胨，是生物培养基的常见成分。
Yeast extract：酵母可溶性部分的浓缩物。
IPTG：可用于蓝白斑筛选。
X-GAL：广泛使用的发色 β-半乳糖苷酶底物。
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