基因扩增基因扩增-PCR技术

发布网友 发布时间：2024-10-07 04:18

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热心网友 时间：2024-10-29 17:31

PCR（聚合酶链式反应）技术是一种类似于DNA自然复制过程的实验方法。其基本原理是，通过在待扩增的DN*段两侧添加与之互补的引物，经过变性、退火和延伸三个步骤，进行多次循环，最终使DNA扩增达到显著倍增。以下是PCR的详细步骤：

变性：在94℃高温下，双链DNA的氢键断裂，形成两条单链，即DNA被"打开"。
退火：温度降至50-60℃，引物与模板DNA互补结合，形成引物-DNA复合物。
延伸：在72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用dNTPs（脱氧核苷三磷酸）复制互补链，即引物的延伸。

每个循环包括高温变性、低温退火和中温延伸，理论上每次循环DNA量翻一倍。经过25-30个循环，DNA扩增可达106-109倍。PCR反应所需的常见设备和试剂包括PCR热循环仪、移液器、PCR板等。以下是实验中常用的试剂和步骤：

10×缓冲液，dNTPMix，耐热Tag酶，DNA模板，合成引物，引物溶液等。
在200ul Eppendorf管中配制20ul反应体系，具体循环条件如：预变性3min，变性30s，退火30s，延伸1min30s（30个循环），延伸4min，最后在4℃暂停。

在实验操作中，注意以下事项：引物设计要具有特异性，避免非特异性扩增；分装引物时避免多次冻融；确保所有反应成分齐全，操作时佩戴手套，低温操作；根据引物特性和PCR条件设定循环条件；分析PCR产物时，需注意可能的问题，如拖带、非特异带、无DNA带或弱带的出现。

gene amplification 为一特异蛋白质编码的基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程。在自然条件下，基因扩增是通过从染色体切除基因的重复序列再在质粒中进行染色体外复制或通过将核糖体RNA的全部重复序列生成RNA转录物再转录生成原来DNA分子的额外拷贝而实现的。在实验室已建立了不等交换、从裂解细胞提取DNA或经过滚环复制生成染色体外序列进行人工基因扩增。例如在爪蟾卵子发生时，编码rRNA的基因数增加约4000倍。

热心网友 时间：2024-10-29 17:31

PCR（聚合酶链式反应）技术是一种类似于DNA自然复制过程的实验方法。其基本原理是，通过在待扩增的DN*段两侧添加与之互补的引物，经过变性、退火和延伸三个步骤，进行多次循环，最终使DNA扩增达到显著倍增。以下是PCR的详细步骤：

变性：在94℃高温下，双链DNA的氢键断裂，形成两条单链，即DNA被"打开"。
退火：温度降至50-60℃，引物与模板DNA互补结合，形成引物-DNA复合物。
延伸：在72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用dNTPs（脱氧核苷三磷酸）复制互补链，即引物的延伸。

每个循环包括高温变性、低温退火和中温延伸，理论上每次循环DNA量翻一倍。经过25-30个循环，DNA扩增可达106-109倍。PCR反应所需的常见设备和试剂包括PCR热循环仪、移液器、PCR板等。以下是实验中常用的试剂和步骤：

10×缓冲液，dNTPMix，耐热Tag酶，DNA模板，合成引物，引物溶液等。
在200ul Eppendorf管中配制20ul反应体系，具体循环条件如：预变性3min，变性30s，退火30s，延伸1min30s（30个循环），延伸4min，最后在4℃暂停。

在实验操作中，注意以下事项：引物设计要具有特异性，避免非特异性扩增；分装引物时避免多次冻融；确保所有反应成分齐全，操作时佩戴手套，低温操作；根据引物特性和PCR条件设定循环条件；分析PCR产物时，需注意可能的问题，如拖带、非特异带、无DNA带或弱带的出现。

gene amplification 为一特异蛋白质编码的基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程。在自然条件下，基因扩增是通过从染色体切除基因的重复序列再在质粒中进行染色体外复制或通过将核糖体RNA的全部重复序列生成RNA转录物再转录生成原来DNA分子的额外拷贝而实现的。在实验室已建立了不等交换、从裂解细胞提取DNA或经过滚环复制生成染色体外序列进行人工基因扩增。例如在爪蟾卵子发生时，编码rRNA的基因数增加约4000倍。