发布网友 发布时间:2024-10-06 12:45
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热心网友 时间:2024-10-22 19:52
导入的受体细胞中不能含有相应的*酶。追答*酶只在微生物中有,我们导入运载体的时候,一定要选择没有那种*酶的细胞(有的细胞有那种*酶就不能用),至于动植物细胞,细胞里根本没有*性内切酶,所以就不用担心了。
热心网友 时间:2024-10-22 19:53
你很好学啊!细菌*酶识别的是没有甲基化的DNA,而质粒本身就是从细菌里面出来的,是经过甲基化了的。所有当质粒转入细菌后不会被分解。如果将PCR合成的DNA转入细菌,就会被分解。追问PCR复制DN*段完成后还要将DN*段导入质粒进行甲基化吗?DNA的甲基化不是可以引起基因的失活吗?这样传入受体cell的DNA不是就不可以进行翻译了吗? 谢谢对上一题的回答,对我帮助不小,还望您再解我惑难之一二,不胜感激。追答*修饰系统只甲基化*位点,所以不会引起基因失活。另外,“ylx660610”说的虽然没错,但是前半部分的分析不符合实际。目的基因(PCR扩增产物,未甲基化)和质粒(一般从菌种提取,是甲基化了的)共同酶切,连接之后,都是先转入大肠杆菌工程菌,比如DH5a,只有甲基化酶,没有*酶。所以重组质粒中的基因片段不会被切割,而经过多次复制后,提取质粒,不管转到什么菌里面,都没关系了。因为已经甲基化了。
至于在真核细胞中表达,还要复杂得多。