干货分享 | 乳酸菌菌液 PCR

发布网友发布时间：2024-10-07 10:16

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热心网友时间：2024-10-07 11:20

乳酸菌菌液 PCR 实验详解

无需提取目的基因 DNA，也不必酶切鉴定，直接利用菌体热解后的DNA模板进行PCR扩增和鉴定，这是一种简便的菌落检测方法。

乳酸菌菌液 PCR 主要用于确认菌落是否含有目标质粒，以下是详细步骤：

从MRS平板上分离纯化菌种，通过多次划线培养直至得到单一纯菌。
培养菌种后，取单菌落悬浮于MRS液体培养基中进行扩增前的培养。
配置PCR体系，包括 Taq Mix、引物、菌液模板，其中阴性对照需使用灭菌ddH2O。
进行PCR反应，设置标准的反应程序，如94℃热启动、56℃退火、72℃延伸等。
反应后，通过琼脂糖凝胶电泳分析产物，确认目标条带并进行测序确认乳酸菌类型。

在操作过程中，需要注意以下几点：

挑取菌落需在超净台上进行，以防止污染。
PCR耗材需灭菌处理，保证无酶活性。
反应体系需精确配制，引物设计需精确，避免非特异性或二聚体影响。
严格控制PCR反应条件，确保反应的准确性和稳定性。
PCR后进行质量控制，确保结果可靠。

在实验过程中，可能会遇到如非特异性扩增、无扩增、产物不稳定等问题，需针对性地调整反应条件或优化体系。