不同细胞对G418筛选浓度的要求是否一致?
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发布时间：2024-10-04 20:48
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时间：2024-10-05 02:04
在进行筛选操作之前，关键因素是细胞对G418的反应差异。由于每种细胞对G418的敏感度各异，且不同厂家生产同一浓度G418的活性可能存在差异，因此筛选步骤需要精心设定。首先，将细胞稀释至1000个细胞每毫升，然后在100微克/毫升至1毫克/毫升的G418浓度范围内进行实验。目标是找出能使细胞在10到14天内完全死亡的最低G418浓度，以此作为后续筛选的基准。
通常，细胞对G418的敏感度范围在100微克/毫升到1000微克/毫升之间，但这并非固定不变，需要根据具体细胞类型和实验条件进行调整。尽管不同批次的G418活性有所差异，但对于一些特性明确的细胞系，如《分子克隆》中所列举的，其最佳G418用量通常相对稳定。因此，在开始筛选之前，务必确保对所使用的G418进行适当的浓度优化，以达到最佳筛选效果。
扩展资料
G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。它通过抑制转座子Tn601，Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。
