科研小白血泪之细胞划痕实验经验总结
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发布时间:2024-10-05 01:43
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时间:2024-11-16 08:40
细胞划痕实验,作为科研小白的入门选择,其背后的原因与优势包括:
模拟体内细胞迁移过程,研究细胞与ECM和细胞间相互作用导致的迁移行为。
兼容显微镜系统,便于分析细胞互动,尤其是活细胞成像。
简单且成本低廉,是实验过程中的关键考虑因素。
进行实验前,你需要准备的材料有基本的实验器材,如细胞样品、六孔板、marker笔、直尺、*头、无血清培养基、PBS等,所有设备务必灭菌,工作台进行紫外线消毒。
实验对象通常选择上皮和纤维样细胞,它们迁移能力强且有极性,适合观察。同时,这些细胞对无血清环境有一定的适应性。
操作步骤如下:
在六孔板上画线定位,每个孔接种适量细胞(5*10
5个,可根据细胞密度调整),确保细胞铺满且无空隙,以保证数据的准确性。
用*头制造划痕,尽量保持划痕宽度一致,条件允许时,使用culture Insert可获得更一致的宽度。
清洗并更换培养基,区分实验组和对照组,注意温和操作以避免细胞损失。
在37度5% CO
2培养箱中培养,每隔预设时间(如0、6、12、24小时)拍照,避免细胞过度增殖带来的假阳性。
图像分析时,使用Image Pro Plus或ImageJ打开处理图片,通过边缘检测和测量工具分析划痕的面积和长度。
计算划痕宽度,注意随时间推移,划痕会缩小,应计算其宽度变化而非比例。
以上就是细胞划痕实验的基本流程,希望对你有所帮助。实验万事屋提供参考。