#微观探索人体奥秘# 044 甲基化测序技术(中)

发布网友发布时间：2024-10-10 13:39

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热心网友时间：2024-11-22 22:57

泛生子提供分子诊断整体解决方案，推出“泛谈-分子诊断”专栏，旨在与伙伴共同探索技术发展、临床应用与检验进步，为病患提供精准诊疗。近期主题聚焦测序技术，包括DNA、RNA、单细胞与甲基化测序。甲基化测序方法，如PCR与测序，因PCR过程删除甲基化信息而占据主导地位。

为检测DNA甲基化，DNA样品需进行预处理，包括*性内切酶消化或亚硫酸氢盐转化。现有基于NGS的DNA甲基化分析技术分为两组：亚硫酸氢盐转化（RRBS、WGBS）与无需转化（核酸内切酶消化、亲和富集）。亚硫酸氢盐转化方法通过碱基转换检测甲基化，如TAPS、EM-seq与亚硫酸盐测序法，转化高效率、重复性好，但数据产量易受损失。为解决此问题，PBAT方法被开发。

RRBS与WGBS是流行的全基因组甲基化分析方法。RRBS使用特定*酶筛选GC丰富区域，操作包括*性内切酶处理、末端修复、接头连接、大小选择、亚硫酸氢盐处理、PCR扩增与测序。RRBS优化方法如scRRBS、Q-RRBS与MID-RRBS，分别针对单细胞研究、PCR偏差与DNA丢失。WGBS方法类似，但在基因组覆盖度与分析复杂性上具有优势。

无需亚硫酸氢盐转化的甲基化检测分为核酸内切酶消化与亲和富集。MRE-seq利用*性内切酶识别未甲基化CpG位点，推断DNA甲基化状态。MBD-seq与MeDIP-seq基于亲和性，产生平均甲基化谱，不适用于单细胞测序。