什么是感受态细胞?如何制备感受态细胞?
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发布时间：2024-10-10 14:39
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时间：2024-11-08 07:25
感受态细胞是细菌的一种生理状态，只有在感受态状态下，细胞才能稳定吸收外来DNA分子。其中，PUC18质粒的LacZ基因区域在有插入片段时会失活，转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和X-gal的培养基中产生白色克隆；反之，不含插入片段的质粒产生蓝色菌落。
目前，常用感受态细胞制备方法有两种：电击法和CaCl2法。电击法效率较高，但CaCl2法操作简单且转化效率满足一般实验需求，因此使用更为广泛。
CaCl2法制备感受态大肠杆菌的步骤如下：
首先，配制0.05mol/l的CaCl2-15%甘油混合溶液并高温高压灭菌，所有实验器材用去离子水清洗并高温高压灭菌。其次，从非选择性LB培养基上挑取单菌落，接种于LB液体培养基中进行过夜培养，培养至对数生长期中后期，再接种于LB培养基中振荡培养2.5小时至OD600=0.5。注意，培养时间不宜超过2.5小时，以达到最高转化效率。
接着，收获细菌，将培养液冰浴5分钟后，4℃5000rpm离心5分钟，然后用冷去离子水洗涤沉淀，离心5分钟。随后，沉淀加入2ml冷的0.05mol/l CaCl2-15%甘油混合溶液，轻吹散后冰浴5分钟，然后加入同样的溶液，使细菌成为感受态细胞悬液。最后，将感受态细胞分装成50-100ul小份，置于-70℃可保存半年。注意，最好在两个月内使用，若需提高转化效率，可减少加入溶液体积至1ml或分装为200ul/管。
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什么是感受态细胞?如何制备感受态细胞?
感受态细胞是细菌的一种生理状态，只有在感受态状态下，细胞才能稳定吸收外来DNA分子。其中，PUC18质粒的LacZ基因区域在有插入片段时会失活，转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和X-gal的培养基中产生白色克隆；反之，不含插入片段的质粒产生蓝色菌落。目前，常用感受态细胞制备方法有两种：电击法和CaCl2法。电击法...
感受态细胞的制备
感受态，指的是细菌在一定的条件下可以吸收外部环境中的DNA的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄、外界环境因子的影响。细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和成功转化的关键。AGL1感受态细胞 实验原理：目前,感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理...
感受态细胞的制备方法是什么?
感受态细胞制备常用方法是CaCl2法。感受态细胞：是指用理化方法诱导细胞，吸收周围环境中的DNA分子，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。CaCl2法制作感受态细胞的步骤：1.将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上, 37℃恒温培养箱培养12-16h,挑取单个菌落，接种至10 mLLB普通肉汤中，37空气摇床震...
什么是生发态细胞法,什么是感受态细胞法?
所谓【感受态细胞】(competent cell)，就是：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态 最常见的【感受态细胞制备法】是CaCL2法 现在都用TFB或FB法 对处理溶液添加微量离子提高感受态效率
感受态细胞(细菌),什么是感受态细胞
那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然...
什么是感受态细胞
感受态细胞是指能够接受外源性DNA或RNA等遗传物质并将其导入核内或细胞器内的细胞状态。它在外源基因的转化、重组和表达过程中扮演着关键角色。这种细胞状态是许多生物学研究的基础，特别是在基因工程和细胞工程领域。感受态细胞通常是通过特定的化学或物理方法诱导产生的，这些方法能够改变细胞膜的通透性，使得...
感受态的制备
感受态细胞的制备 一、答案：感受态细胞的制备主要包括选择适当的宿主细胞、培养细胞至对数生长期、进行预处理使细胞处于能接受外源DNA分子的状态。具体步骤涉及细胞培养、化学或物理方法诱导细胞处于感受态，以及后续的离心、洗涤和重悬等步骤。二、详细解释：1. 选择宿主细胞：感受态制备的第一步是选择适合的...
感受态细胞的制备是什么?
感受态细胞的制备常用冰预冷的CaCl2处理细菌的方法制备，即用低渗CaCl2溶液在低温0℃时处理快速生长的细菌，从而获得感受态细菌。感受态细胞的特点 理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或...
感受态细胞的制备
感受态细胞的制备如下：1、从37℃培养过夜的新鲜平板中挑DH5α单菌落，接种到5mLLB培养基中，37℃下270r/min震荡培养过夜；2、取2mL过夜培养菌液注入到100mLLB培养基中，37℃下激烈震荡培养至A600=0.4～0.6（约2h）；3、将培养液转移到灭菌过的50mL离心管中,在冰上放置10min;4℃下4000r/min...
感受态细胞名词解释
感受态细胞是一种特殊的细胞类型，能够感知和传递外界刺激信息的细胞。1.感受态细胞的定义和特征 感受态细胞是一类能够感知和响应外部刺激的细胞。它们广泛存在于人体的各个组织和器官中，如皮肤、眼睛、耳朵、舌头等。这些细胞通过与外界物质的接触或感受外界的刺激，将这些信息传递给神经系统，并最终被大脑所...
