酶标抗体制备技术(五)碱性磷酸酶

发布网友发布时间：2024-10-09 17:15

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热心网友时间：2024-10-09 18:08

酶标抗体制备技术中的一个重要分支是碱性磷酸酶（AP）应用，Mason等人在1978年提出了利用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶复合物（APAAP）的新型酶标技术。然而，常规免疫方法制备的针对AP的抗血清，往往难以满足APAAP技术的高质量标准，限制了其广泛应用。对此，杨志刚等人在1989年创新性地提出了一种简便的APAAP复合物制备方法。具体操作是将AP与特异性的抗AP单克隆抗体（McAb）按照适当比例混合，于4℃条件下孵育过夜，形成稳定的复合物。检测过程中，可以采用改良的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法进行操作。首先，将羊抗鼠IgG包被到微量滴定板上；然后加入适量的抗APMcAb；接着，逐步增加AP的浓度并洗涤，去除未结合的成分；最后，加入底物并测量吸光度（OD值）。实验结果显示，随着AP含量的增加，OD值也随之上升，当AP浓度达到6～8mg/mL时，OD值趋于稳定。这种方法简化了制备过程，提高了APAAP复合物的质量，为该技术的广泛应用奠定了基础。

扩展资料

酶标抗体制备技术基本要求是将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合既不改变抗体的免疫反应活性，也不影响酶的生物化学活性。用于标记抗体的酶较多，常用的有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化物酶和β-半乳糖苷酶等。