一代二代三代测序的基本原理及区别是啥啊?

发布网友发布时间：2024-10-09 22:43

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热心网友时间：2024-11-18 21:30

一代测序技术，即Sanger测序，通过利用双脱氧核苷酸终止PCR的原理，可快速确定序列中每个碱基的位置BP信息。此技术适用于单序列测序，能检测长度在1000bp左右的序列，广泛应用于单序列测序领域。

二代测序技术，也被称为高通量测序，解决了只能测一条序列的限制。通过物理或化学方式将DNA随机打断成小片段，进行建库，之后将库放入测序仪，一次检测大量DNA序列信息。通过生物信息学分析将小片段拼接成长片段，适用于大规模分析物种或样本中的所有序列信息。

二代测序的一大特点是能够同时检测大量序列，但序列长度受限于250-300bp。序列拼接依赖于重叠区域，部分序列可能多次被测序。由于建库过程中使用了PCR技术，可能导致量少的序列无法大量扩增，造成信息丢失。此外，PCR过程中可能引入错配碱基。

三代测序是对二代测序的升级，一次能测大量序列，测序长度可达10kb左右，且无需PCR富集序列，避免了信息丢失和碱基错配问题。然而，三代测序技术依赖DNA聚合酶活性，成本高，错误率在15%-40%，高于二代测序。错误率随机发生，通过增加测序覆盖度可纠错，但增加了测序成本。