质粒dna在琼脂糖凝胶中应为一条带,但有时出现三条带的原因有哪些
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发布时间：2022-05-20 21:30
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时间：2023-08-09 12:51
质粒DNA原则上是一条带，但通常跑胶会看到三条，这是正常情况。因为质粒是环形的DNA，稍有降解就会变成一条为线性，再厉害些，就成了线性DNA，三者在琼脂糖凝胶中速率不同，自然会出现三条带。
标准就是三条带，有时候两条。因为质粒有不同的构象：超螺旋、环形、线形，电泳速度是不一样的。
扩展资料
功能
质粒具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体。
载体是指把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。将某种目标基因片段重组到质粒中，构成重组基因或重组体。
然后将这种重组体经微生物学的转化技术，转入受体细胞(如大肠杆菌)中，使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达，从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。
根据质粒能否通过细菌的接合作用，可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。
根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。
松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。
根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象，反之为相容性。常用于流行病学的调查。
参考资料：百度百科-质粒
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时间：2023-08-09 12:52
质粒DNA原则上是一条带，但通常跑胶会看到三条，这是正常情况。因为质粒是环形的DNA，稍有降解就会变成一条为线性，再厉害些，就成了线性DNA，三者在琼脂糖凝胶中速率不同，自然会出现三条带。
大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化，常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。
扩展资料：
去除RNA：
对于某些用途（例如用BAL31进生活化或用T4噬菌体多核苷酸激酥标记质粒DNA的*切片段的5'端），必须获得无RNA污染的DNA制品。
尽管在通过氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心所制备的质粒DNA中，这样的RNA污染物的质量已很少，但其中的RNA分子数仍可能相当可观，并可在*酶消化反应的全部5'端中占据较大的比例。
通过下述方法，可以从质粒制品中去除RNA。通过Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B进行层析。
1、 制备质粒DNA。
2、 有等体积的经TE(pH8.0)平衡后的酚抽提1次。
3、 将至多1ml的水相铺在经TE(pH8.0)和0.1%SDS平衡的Bio-Gel A-150m或Sepharase CL-4B(1x10cm)柱上。
4、 将DNA装入层柱并在柱的上部连接上含0.1%SDS的TE(pH8.0)的贮液瓶，立即开始以0.5ml流出液为1流进行收集。
5、 当收集到15份时，关闭柱底部，为明确质粒DNA的分布情况，可在每份收集物中取10μg样品，通过0.7%琼脂糖凝胶电泳或溴化乙锭荧光进行分析。
6、 将含质粒DNA的组成合并在一起，加2倍体积的乙醇于4℃沉淀10min，然后以4℃大于10 000rpm离心15min，以回收DNA。
参考资料来源：百度百科-质粒dNA纯化
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