以叶片为例陈述外植体灭菌及初代接种的一般过程

发布网友发布时间：2022-05-16 20:50

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热心网友时间：2023-08-11 07:44

摘要你好，以叶片为例陈述外植体灭菌及初代接种的一般过程如下：1．实验一制备的培养基即是本实验所用培养基。2．接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台。房间用酒精喷雾降尘后打开超净工作台紫外灯及房间的紫外灯，照射约30mins；然后关闭紫外灯，打开房间换气扇以及超净工作台的风机，并微启超净工作台的玻璃挡板，通风20min后，即可进行无菌操作。3．选取生长健壮的叶片，用饱满又未萌发的侧芽作为外植体（取中部的芽较好）。将外植体用手术刀切去叶片，并剥去附在茎上的叶柄及皮刺，用毛刷沾洗衣粉刷洗并在自来水下冲洗干净。吸干水份后切成约2-3cm的茎段，每段至少有1个侧芽。将处理好的外植体转入洁净的消毒缸中，用加了数滴吐温-80的0.1%的升汞溶液浸泡10min。在表面灭菌过程，应不停摇动消毒缸使消毒液与外植体充分接触。4．进入接种间，用酒精棉球仔细擦拭双手至手腕部位5．把浸泡在消毒液中的外植体转移到超净工作台中。消毒时间结束后在酒精灯火焰旁用无菌镊子将已完成表面灭菌的外植体转移到烧杯中，用无菌水清洗5次，每次不少于1分钟，洗时不断摇动烧杯以确保完全除去消毒剂。最后一次清洗后将外植体转移到无菌烧杯上，吸干水分备用。6．接种时，将消毒后的外叶片首尾切除（中间至少有一芽），再按极性方向用镊子接种到培养基上，接种时，每一次操作完后将镊子等器械浸入75%酒精中，再将器械取出后置于酒精灯火焰上充分灼烧，待冷却后方可使用。每瓶可接入3～4段喜树茎段。7.每瓶接种完毕后，将瓶口置火焰上转动烧烤，以杀死瓶口上的细菌，再封好瓶口，贴上标签。8，接种完后清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30分钟。9.将培养瓶放置在21±2℃，光强800～1200lx，光周期为12h的环境下培养。每周观察一次，将污染的外叶片拿走洗掉。咨询记录 · 回答于2021-09-26以叶片为例陈述外植体灭菌及初代接种的一般过程你好，以叶片为例陈述外植体灭菌及初代接种的一般过程如下：1．实验一制备的培养基即是本实验所用培养基。2．接种前，用75%酒精棉球擦拭超净工作台台面，将培养基及接种用具放入超净工作台。房间用酒精喷雾降尘后打开超净工作台紫外灯及房间的紫外灯，照射约30mins；然后关闭紫外灯，打开房间换气扇以及超净工作台的风机，并微启超净工作台的玻璃挡板，通风20min后，即可进行无菌操作。3．选取生长健壮的叶片，用饱满又未萌发的侧芽作为外植体（取中部的芽较好）。将外植体用手术刀切去叶片，并剥去附在茎上的叶柄及皮刺，用毛刷沾洗衣粉刷洗并在自来水下冲洗干净。吸干水份后切成约2-3cm的茎段，每段至少有1个侧芽。将处理好的外植体转入洁净的消毒缸中，用加了数滴吐温-80的0.1%的升汞溶液浸泡10min。在表面灭菌过程，应不停摇动消毒缸使消毒液与外植体充分接触。4．进入接种间，用酒精棉球仔细擦拭双手至手腕部位5．把浸泡在消毒液中的外植体转移到超净工作台中。消毒时间结束后在酒精灯火焰旁用无菌镊子将已完成表面灭菌的外植体转移到烧杯中，用无菌水清洗5次，每次不少于1分钟，洗时不断摇动烧杯以确保完全除去消毒剂。最后一次清洗后将外植体转移到无菌烧杯上，吸干水分备用。6．接种时，将消毒后的外叶片首尾切除（中间至少有一芽），再按极性方向用镊子接种到培养基上，接种时，每一次操作完后将镊子等器械浸入75%酒精中，再将器械取出后置于酒精灯火焰上充分灼烧，待冷却后方可使用。每瓶可接入3～4段喜树茎段。7.每瓶接种完毕后，将瓶口置火焰上转动烧烤，以杀死瓶口上的细菌，再封好瓶口，贴上标签。8，接种完后清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30分钟。9.将培养瓶放置在21±2℃，光强800～1200lx，光周期为12h的环境下培养。每周观察一次，将污染的外叶片拿走洗掉。希望对你有所帮助。