纯化dna的方法有哪些
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发布时间：2022-05-16 20:36
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热心网友
时间：2024-03-01 20:09
【实验材料】
待纯化的DNA溶液。
【实验仪器】
高压灭菌锅，涡旋混匀器，台式高速冷冻离心机
【试剂配制】
1、Tris饱和酚（pH8.0）：氯仿：异戊醇混合液
酚：氯仿：异戊醇按体积比25：24：1配制，现配现用。
2、氯仿：异戊醇混合液
氯仿：异戊醇按体积比24：1配制，现配现用。
3、醋酸钠溶液
配制3 mol／L的醋酸钠溶液，调节pH值至5.2。
4、TE缓冲液
10 mmol／L Tris·HCl（pH 8.0），1 mmol／LEDTA（pH 8.0），配制完成后高压灭菌，4 ℃保存。
【实验步骤】
1、在待纯化的DNA溶液中加等体积的酚：氯仿：异戊醇混合液，然后在涡旋混匀器上充分混匀。
2、将混合物12000 r／min离心10 min后，移取上层含DNA的水相到另一离心管中。如果在水相和有机相交界处有白色沉淀物，则需要重新抽提水相，直到两相交界处无明显沉淀物。
3、向上层水相中加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）混合液，在涡旋混匀器上充分混匀后12000 r／min离心10 min。
4、移取上层含DNA的水相到另一离心管中，加1／10体积的醋酸钠溶液，充分混匀，再向管中加入2.5倍体积的预冷无水乙醇，上下倒置混匀，于-20 ℃保存30 min。
5、12000 r/min离心5 min，弃上清液；75%的乙醇12000 r/min离心洗涤5 min，弃上清液；用吸头将管壁残留的乙醇去除，室温干燥10-15 min（不要等DNA沉淀完全干燥，否则DNA不易溶解）。
~ 1 / 2 ~
6、在盛有干燥DNA的离心管中加入适量TE缓冲液，溶解后在-20 ℃以下长期保存。
热心网友
时间：2024-03-01 20:09
首先利用琼胶电泳将不同分子量的DN*段分开,将某一特定分子量区域的琼胶切下,利用DNA extraction kit将DNA从琼胶中溶出并浓缩.
实验材料
( 6X gel-loading dye:15% Ficoll 400, 0.25% bromophenol blue,
0.25% xylene cyanol
( 紫外光箱
( 下列试剂来自GeneAid公司所售的Gel/PCR Fragment Extraction Kit:
* DF Buffer
* Wash Buffer
* Elution Buffer:10mM Tris-HCl(pH8.5)
* DF Column
* 2ml Collection Tube
实验步骤
A.将欲分离之DNA混合物以0.7%琼胶电泳分离.
B.电泳后,将琼胶置於紫外光箱上观察,把含有欲纯化之DN*段的琼胶部位切下.
C.将步骤B的琼胶以蓝色微量吸管尽可能戳碎.
D.加入500ml DF buffer,55oC作用10分钟,每2-3分钟摇晃数次,直至琼胶完全溶解.
E.将步骤D琼胶溶液全部吸入DF Column,并套上Collection Tube(收集过滤液).
F.8000rpm离心1分钟,将过滤液倒掉.
G.加入500ml Wash Buffer,8000rpm离心1分钟,过滤液倒掉.
H.14000rpm离心2分钟.
I.将DF Column转移至上另一乾净的微量离心管.加入15ml Elution Buffer,室温静置2分钟.
J.14000rpm离心2分钟,微量离心管内之液体即为纯化的DN*段.
K.取0.5ml纯化的DNA加入4.5mlDDW及1ml 6x DNA loading dye,跑0.7%琼胶电泳,与marker比较,估计DNA的浓度.
