发布网友 发布时间:2022-05-17 02:39
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热心网友 时间:2023-09-22 15:12
一是快速冷冻法。将保存材料从0摄氏度或其他预处理温度直接投入液氮中。此法适于那些高度脱水的植物材料,如种子、花粉、球茎或块根等。一些抗寒木本植物的枝条或冬芽,也可用此法。此外,不少植物的茎尖组织保存用此法也有成功的报道。二是慢速冷冻法。在冷冻保护剂存在下,以每分钟下降0.110摄氏度的速率降温进行冷冻。在这种降温速率下,可通过细胞外结冰,使细胞内的水分减少到最低限度,从而达到良好的脱水效果。
此法需要程序降温仪,技术系统昂贵,但对许多不抗寒的植物而言,易保存成功。三是两步冷冻法。先用慢速降温法降到-50-30摄氏度,使细胞达到保护性脱水状态,后再投入液氮中迅速冷冻。
目前,大多采用每分钟降低0.54摄氏度的速率降到-40摄氏度,然后投入液氮。萝卜、长春花、甘蔗、人参、杨树等悬浮细胞或愈伤组织以此法获得了成功。四是逐级冷冻法。此法是制备不同等级温度的冰浴,如-10摄氏度,-15摄氏度,-23摄氏度,-35摄氏度或-40摄氏度等。保存材料经冷冻保护剂在0摄氏度预处理后,逐步通过这些温度,样品在每级温度上停留一定时间(46min),然后浸入液氮。