primer-blast怎么读

发布网友发布时间：2022-05-16 21:19

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热心网友时间：2023-09-11 01:38

a 引物长度一般在20bp左右，上下游引物碱基长度不要相差超过4个碱基。
b 引物退火温度一般在58度，不同TM使用不同的算法，primer3，primer 5，primer 6，primer express等一般可以设置在55-58度，beacon design可以设置在65左右。
c GC含量一般没什么特殊要求，40-60最好，如果不好设计，30-80也是可以的。
d 产物长度在100-150,80-200也可以，不要在50bp左右，那样和引物二聚体不易区分，超过200bp可能会影响PCR扩增效率。
e 给出的引物不能有发卡结构和超过3-4个碱基的匹配，特别是3`端不能有碱基匹配，那样更容易形成二聚体。
f 引物设计好以后，在NCBI上做一个primer-blast，检测一下是否有非特异性扩增。