为什么发酵的大肠杆菌提取质粒时难裂解

细胞壁结构。大肠杆菌的细胞壁是由多层的薄壁和厚壁组成的，其中薄壁含有较少的N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰半乳糖胺（NAM），而厚壁则富含这两种物质，这种结构使得细胞壁难以被裂解，从而影响了质粒的提取。大肠杆菌是条件致病菌，在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织...

大肠杆菌质粒裂解系统是一种常用的生物技术工具，用于从大肠杆菌细胞中提取质粒DNA。该系统利用特定的化学物质或酶，破坏大肠杆菌细胞的细胞壁和细胞膜，使质粒DNA得以释放。随后，通过离心和纯化步骤，可以从裂解物中分离出高质量的质粒DNA。这一过程对于基因工程、分子生物学和生物技术等领域的研究至关重要，因为它允许科学家们在体外操作、复制和编辑DNA，以推动科学研究和技术创新。利穗科技（苏州）有限公司于2009年在苏州生物纳米园成立，为国家高新技术企业。目前，利穗拥有45000平米的生产基地及3500平米的应用开发实验中心，员工人数超过450人。利穗是生物制药行业下游纯化设备制造商和工程解决方案提供商，服务超过1000...

1、杂菌污染。这种情况一般可能性最大，可能在你前面的步骤中引入杂菌，后面扩大培养时杂菌达到一定数量，耗氧和耗养增加。解决办法：用具杀菌。2、发酵罐条件设置不适合。这种情况比较常出现在新手中，查看你的各条件设置，查看发酵罐使用过程中各条件变化。3、噬菌体污染。这是一种非常恶心的一种状况，...

首先检查质粒赋予大肠杆菌的标记（如抗性）是否存在。如果还存在说明质粒还在，未丢失，是你提取方法有问题。若连标记（抗性）都不在了，那么肯定质粒不在了，连提取都不要，肯定提不到质粒DNA的了。

碱性裂解法提取质粒原理如下：在pH12.0~12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽变性但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可...

原因可能是：1、培养时间有点短了，导致菌液浓度较低 2、提取质粒时，损耗的较多，不知道你用的是试剂盒还是碱法，可以再洗脱离心的时候，将弃液转移回去再多离心一次，可以提高回收率；你也可以多提几管，最终合并为一管，提高浓度 只有3、400bp，不知道你指的是全部序列还是你的目的基因序列，你...

菌群体积，碱裂解液的pH值等。1、菌群体积：菌量越多，则质粒的提取量就越多。2、碱裂解液的pH值：碱性过强会影响DNA的纯度，而过弱则会影响碱裂解效果。pH值在12左右，效果较好。

松散的环状DNA，超螺旋结构DNA（在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA）其实这三种结构分子量相同，由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同，因此出现三条条带。标准的质粒提取实验中只存在后两种结构，线性DNA是由于提取操作过于剧烈或缓冲溶液pH不适宜造成的DNA断裂。

事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞,碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解,这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化所导致。用了不新鲜的0.4 N NaOH,即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌(不妨可以自己试一下),自然就难高效率抽提得到质粒。如果只用SDS当然也能...

在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA）其实这三种结构分子量相同，由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同，因此出现三条条带。标准的质粒提取实验中只存在后两种结构，线性DNA是由于提取操作过于剧烈或缓冲溶液pH不适宜造成的DNA断裂。过于震荡可造成电泳条带拖尾现象。

跟SDS一样，裂解细胞壁释放质粒用的。不过不加也没什么问题，NaOH与SDS足够将大肠杆菌细胞壁裂解开。