载体单酶切后去磷酸化,再与酶切的片段连接,总是自连,谁帮分析下?

发布网友发布时间：2023-09-30 20:53

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热心网友时间：2024-02-06 03:51

建议检查一下是不是载体去磷酸化时酶的使用方法不对或者其他原因造成去磷酸化不完全。不然不太可能自连。我最近在做单酶切载体和片段，但是载体单酶切后没有去磷酸化，T4连接后转化进DH5α，长出很多很密集的菌落，挑了单菌落后摇菌一晚也浑浊了，提质粒后显示质粒浓度特别小，只有30-40 ng/ul，载体本身大小是11k，如果插入了插入片段后，大小是13k。送了一次菌液显示模板浓度小，最大量测序也失败了。准备送质粒去公司测序试试

热心网友时间：2024-02-06 03:51

激酶，就是指蛋白激酶。激酶：将ATP的γ磷酸基转移到底物特定的氨基酸残基上，使蛋白质磷酸化的一类磷酸转移酶。根据其底物蛋白被磷酸化的氨基酸残基种类，可将它们分为5类：蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶、蛋白酪氨酸激酶、蛋白组氨酸激酶、蛋白色氨酸激酶和蛋白天冬氨酰基/谷氨酰基激酶。
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激酶： http://proct.bio1000.com/100013/